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背景与目的： 我国是胃癌的高发区，其死因多为转移，因此急需探讨其转移机制。TGF-β是一种有趣的蛋白分子，早期可抑制肿瘤生长，晚期却促进肿瘤浸润与转移。本课题组前期研究表明外源性TGF-β能明显促进胃癌细胞的浸润和转移，但其功能转换的机制尚未明确。smad3是TGF-β信号通路中的重要分子，其磷酸化分为羧基末端的磷酸化(p-smad3C)和连接区的磷酸化(p-smad3L)，研究表明，TGF-β诱导的生长抑制作用由p-smad3C介导，而TGF-β促浸润与转移作用可由p-smad3L介导。fascin是一种在正常上皮中极少表达的细胞骨架蛋白，在胃癌等多种肿瘤中高表达，与胃癌的浸润和淋巴结转移密切相关。本研究旨在探讨p-smad3L信号级联在TGF-β诱导胃癌细胞中表达fascin的作用，为进一步阐明TGF-β信号通路在胃癌恶性进展中的分子机制提供实验依据。 方法： (1)采用细胞免疫荧光检测TGF-β处理前后细胞fascin的表达以及癌细胞表面伪足的生长;(2) RT-PCR和western blotting检测TGF-β1处理前后以及处理不同的时间点后对fascin表达的影响;(3) RT-PCR和western blotting检测 smad3 siRNA对TGF-β1诱导fascin表达的影响;(4)western blotting检测TGF-β1处理不同的时间点后对smad3连接区s204、s208、s213磷酸化水平的影响;(5)构建fascin报告基因质粒，检测TGF-β1及不同smad3突变体对fascin启动子报告基因活性的影响。 结果： (1)TGF-β1刺激胃癌细胞株MKN45和AGS后，细胞表面伪足明显增多;(2) TGF-β1刺激胃癌细胞株MKN45、BGC823以及AGS后，可见fascin在三株细胞中表达量均升高并且存在明显的时间规律，表现为其mRNA的增强有一个0.5-2h的延迟，2-4h达到高峰，而蛋白的增强有一个0.5-2h的延迟，4-8h达到高峰并维持4-12h后逐渐减弱;(3)瞬时转染smad3 siRNA后，加入TGF-β1刺激细胞，可见smad3 siRNA有效的降低了smad3的表达，并显著抑制了TGF-β1对fascin的诱导表达。(4)TGF-β1刺激人胃癌细胞株MKN45、BGC823以及AGS后，可见在三株细胞中smad3的连接区磷酸化位点s204、s208、s213的蛋白表达量均明显升高，存在一定的时间规律并与fascin表达的时间规律一致，表现为一个0.5-2h的延迟期，延迟期后稳定升高，1-4h达到高峰并维持2-4h后逐渐减弱;(5)构建fascin报告基因质粒pGL3-FSCN1-Luc(-1375～+81)，胃癌细胞MKN45和BGC823在TGF-β1处理后，smad3WT（野生型）、smad3 EPSM(smad3连接区突变体，连接区不能被磷酸化)和smad33A（smad3羧基末端突变体，羧基末端不能被磷酸化）各组间的fascin-Luc活性比TGF-β1处理前明显增高（P＜0.05);TGF-β1处理后，smad3 WT转染组fascin-Luc的活性较单纯TGF-β1处理组活性明显增高（P＜0.05)。 结论： (1)TGF-β1能够促进胃癌细胞伪足的形成;(2) TGF-β1能够诱导胃癌细胞fascin的表达，并且其表达具有时间规律性;smad3基因表达的下调能抑制TGF-β1对fascin的诱导作用;TGF-β1能够通过smad3增加fascin的启动子活性;(3)TGF-β1能够促进胃癌细胞smad3连接区的磷酸化位点s204、s208、s213蛋白的表达，其表达具有时间规律性并与fascin表达的时间规律一致;(4)TGF-β1对fascin的诱导作用依赖于smad3，p-smad3L很有可能在此过程中起主要作用。