博落回苯并菲啶类生物碱的杀螺活性及其机理

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博落回在自然界中分布广泛,也是一种常用在农业和畜牧业的杀虫草药,体内含有的各类生物碱大多具有毒性,根据前人的研究这种植物也具有较好的杀螺活性,故本文希望通过研究其提取分离的生物碱对钉螺的毒杀效果并改良适合于工业大量提取分离的方法,来开发一种极具应用前景的植物源杀螺药物。本文首先采用酸水法和乙醇法分别提取博落回叶片和果荚中总生物碱,酸水法提取率分别为4.96%、8.07%,乙醇法提取率分别为3.59%和5.76%。因此,酸水法的提取效果明显优于乙醇法,两种方法提取率均表现为博落回果荚中总生物碱的含量明显高于叶片中总生物碱的含量。用酸水法提取的博落回叶片总碱和果荚总碱分别对钉螺进行浸杀实验,结果显示,叶片总碱和果荚总碱在72h时的LC50分别为182.1 mg/L和25.1mg/L,表明来自博落回果荚的总生物碱杀螺活性比来自叶片中总生物碱的杀螺活性强。所以,采用酸水法从博落回果荚中提取杀螺有效成分更为方便有效。然后对博落回果荚中的总生物碱进行了进一步的分离纯化,获得苯并菲啶类生物碱的硫酸氢盐混合物。通过高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)分析博落回果荚总碱和苯并菲啶类生物碱,确定博落回总碱中主要含有血根碱(SA)、白屈菜红碱(CHE)、原阿片碱(PRO)和别隐品碱(ALL)这四种碱,还含有少量的小檗碱(BER),博落回苯并菲啶类生物碱中主要含有血根碱(SA)和白屈菜红碱(CHE)。用博落回苯并菲啶类生物碱进行钉螺浸杀试验,结果显示,在药物浓度为2.5mg/L时处理48h、72h、96h和120h后,钉螺致死率就达到了 68.3%、91.7%、98.3%和100%,在药物浓度为7.5mg/L时处理72h后,钉螺致死率就达到了 100%,在48h和72h时对钉螺浸杀的LC50分别为2.89 mg/L和1.29mg/L。而且同样在1mg/L的浓度下,博落回苯并菲啶类生物碱的杀螺效果接近氯硝柳胺乙醇胺盐(杀螺胺),这说明博落回苯并菲啶类生物碱的杀螺效果与目前使用的主要化学杀螺药物氯硝柳胺乙醇胺盐(杀螺胺)的杀螺效果相当。通过扫描电镜研究了博落回苯并菲啶类生物碱对钉螺头足和肝脏表面结构的损害,发现药物对钉螺头足和肝脏的表皮结构都有很大的损伤效果,尤其是是对头足表皮的损伤更大,这是因为头足相对于肝脏更容易直接暴露在药物溶液之中。通过透射电镜研究了博落回苯并菲啶类生物碱对钉螺头足和肝脏内部结构的损害,发现药物对钉螺头足内的肌肉细胞的损伤效果不显著,而对钉螺肝脏内的细胞的损伤效果非常显著。表明博落回苯并菲啶类生物碱毒杀钉螺的靶器官主要是肝脏。通过测量钉螺肝脏细胞的各类酶活指标研究博落回苯并菲啶类生物碱对钉螺肝脏生物代谢的影响,发现随着处理浓度的升高,钉螺肝脏的谷胱甘肽S-转移酶(GST)、羧酸酯酶(CarE)和碱性磷酸酶(AKP/ALP)的活性都是在低浓度处理时有一段升高的趋势,然后在高浓度处理时或快或慢的下降,同时随着处理时间的加长,各类指标都是在处理前期有一段升高的趋势,然后再处理后期或快或慢的下降。这说明了钉螺在药物处理的前期和在较低浓度处理时体内的各类生物代谢都开始加强,用以抵御药物的毒害,而在药物处理的后期和在较高浓度处理时体内的各类生物代谢都在或快或慢的减弱,表明此时钉螺已经受到了较大的损伤。以上研究结果说明了博落回是一种极有潜力的植物杀螺材料,具有很高的开发价值,从博落回果荚中分离提取的苯并菲啶类生物碱具有极好的杀螺效果,有望开发成一种新型的植物源杀螺药物。本文通过研究博落回中苯并菲啶类生物碱杀螺活性及其机理,希望为未来开发博落回植物源杀螺药物打下一定的基础。
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