神农香菊挥发油指纹图谱的构建及其谱效评价系统研究

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随着抗氧化剂发展的不断深入以及人类安全意识的不断提高,化学合成抗氧化剂所带来的毒副作用日益凸显,有着天然抗氧化活性的植物提取物成为现代科学研究的热点。本课题以野菊花的一个变种——神农香菊作为研究对象,首先结合顶空固相微萃取气相色谱-质谱联用技术分析包括神农香菊在内的不同品种菊花的挥发性成分,确立了神农香菊挥发性成分的特异性;而后,建立神农香菊挥发油指纹图谱,并利用主成分分析进行综合评价;最后,在测定其抗氧化能力的基础上,釆用谱效关系研究的思路,筛选并鉴定了神农香菊抗氧化活性成分。1、利用HS-SPME-GC-MS技术对神农香菊与其原种野菊及市售常用品种杭白菊进行挥发性成分的对比。通过对固相微萃取头的类型、神农香菊粉末用量、固相微萃取温度等进行单因素实验考察,确定最适宜的固相微萃取条件。从不同种类菊花的挥发性成分中可以发现5个样品中化学成分差异较大,共有成分仅有p-伞花烃、石竹烯、金合欢烯。2、采集15批次神农香菊样品,按照中国药典2010版第一部附录XD甲法提取挥发油,计算挥发油的出油率。利用GC-MS对挥发油进行指纹图谱分析,建立神农香菊挥发油的GC-MS指纹图谱,评价不同批次神农香菊挥发油的内在质量。3、通过主成分分析对原始数据的重新组合,最终通过5个主成分对原有指纹图谱中共有的23个指标信息作出概括,包含原指标88.966%信息量。第一主成分PC1可作为神农香菊挥发油平喘作用的描述指标,第二主成分PC2可作为神农香菊挥发油镇痛作用的描述指标,第三主成分PC3可作为神农香菊挥发油止咳作用的描述指标。4、采用DPPH·法,对神农香菊挥发油体外抗氧化条件进行优选,并在此基础上对其抗氧化活性进行了研究。试验结果表明,清除DPPH·能力从强至弱的顺序是:BHT>神农香菊挥发油>维生素E,且不同批次神农香菊挥发油对DPPH·清除率差异较大。5、在神农香菊油GC-MS指纹图谱和药效学研究的基础上,寻找“有效组分群”与抗氧化活性效应之间的联系,获得了神农香菊油GC-MS指纹图谱15个特征峰面积与氧化抑制作用的量化数据,采用灰关联度分析技术,以相对关联度作为评价指标,确定了神农香菊GC-MS指纹图谱特征成分对抗氧化效果的贡献率,继而推测其抗氧化作用。本课题对神农香菊油挥发性成分进行了系统的研究,并与抗氧化活性研究相结合,筛选出了抗氧化活性色谱峰,借助谱效关系,明确抗氧化活性物质结构,有望获得新的纯天然、安全的抗氧化药物;同时又结合湖北资源丰富的地方特色,为神农香菊的深入开发提供科学依据,具有重要的学术价值与现实意义。
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