紫花苜蓿(Medicago sativa)内生菌的分离纯化及鉴定

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植物内生菌普遍存在于植物组织内部,有益的内生菌可对宿主植物产生有益的影响。内生菌因其稳定的生态龛位,能够稳定而持久地发挥作用,引起了植物与微生物学家的广泛关注,成为研究热点。苜蓿(Medicago sativa)是多年生草本豆科植物,具有“牧草之王”的美誉。本研究从紫花苜蓿(Medicago sativa)中分离筛选内生菌,研究其促生和生防作用,为微生物菌肥与微生物农药的研究开发奠定理论基础,提供科学依据。具有重要的生态意义和理论价值。1.从苜蓿中分离筛选出8株内生菌,经过形态学,生理生化及16s rDNA检测鉴定分别属于:细杆菌属(Microbacterium sp.);黄单胞菌属(Xanthomonas sp);节细杆菌属(Arthrobacter sp.);假单胞菌属(Pseudomonas sp.);芽孢杆菌属(Bacillus sp.);葡萄球菌属(Staphylococcus sp.);泛菌属(Pantoea sp.)。2.分离8株内生菌菌株均能够合成ACC脱氨酶、吲哚乙酸(Indole-3-acetic acid,IAA)、嗜铁素,具有溶磷能力。KHY-5与KHY-6合成ACC脱氨酶的能力显著高于其他菌株,其他依次为:KHY-1>KHY-7>KHY-2>KHY-8>KHY-3>KHY-4。KHY-2和KHY-5在不同浓度的L-Trp下,IAA合成量变化差异不显著;KHY-6、KHY-7、KHY-1在L-Trp浓度为500μg/mL时,IAA合成量显著增加;KHY-8、KHY-4、KHY-3的IAA合成量随着底物浓度的增加而增加。8株内生菌合成嗜铁素的能力从大小依次为:KHY-6、KHY-5、KHY-7、KHY-3、KHY-4、KHY-2、KHY-8。8株苜蓿内生菌中,溶磷能力最强的为KHY-7,其溶磷能力为324.47μg/mL;KHY-1与KHY-6的溶磷能力最弱,分别为23.60和23.76μg/mL。3.分离出的8株植物内生菌,均能显著促进苜蓿生长。施用内生菌处理的苜蓿,株高、地上鲜重、根长、地下鲜重、地上干重、地下干重等指标均显著高于对照组,能有效促进苜蓿生长。在农田土实验中,综合各项指标,对苜蓿促生效果最好的是KHY-5,ASL10次之;在盐碱土实验中,对地上部分促生效果较好的为KHY-7,KHY-6与KHY-8其次。4.内生菌KHY-8具有广谱抗菌性,能够显著抑制尖孢镰刀对苜蓿造成的萎蔫作用。平板拮抗实验中,内生菌KHY-8对尖孢镰刀真菌的抑制率为73.33%;活体生防实验中,对照组几乎全部发病,病情指数达到88.98%。处理组显现个别发病症状,发病率低,症状轻,与对照组相比差异明显,病情指数为37.5%,相对防效为57.81%。能够显著抑制尖孢镰刀生长。表明该菌具有生物防治活性。
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