随着社会经济的发展，人民生活环境和饮食习惯发生重大改变，癌症的发生率也大大增加。在当今中国，原发性肝癌是发生率很高的一种恶性肿瘤，每一年大概有二十二万人因肝癌去世，在因肿瘤引起的死亡中位居第二位，严重影响国民的生命健康。目前传统的手术切除是治疗肝癌的主要方法，但由于术后五年复发率依旧高达43.0％~64.5％，术后复发也是许多肝癌患者死亡的重要原因。因此，早期筛查和预防肝癌，研究肝癌的潜在靶点及治疗药物具有重要的意义。细胞色素P4503A4(CYP3A4)是一种重要的代谢酶，属于细胞色素P450家族，在许多药物和内源性物质代谢过程中起重要作用，50％以上的临床医学药物是由此酶代谢，包括紫杉醇、长春新碱、伊立替康等多种化疗药物。　　本实验首先使用质粒小量提取试剂盒从大肠杆菌中提取质粒，采用Lipofectamine2000(以下简称lipo2000)脂质体转染法将所得到的四种质粒：18294、18296、18297、乱序质粒CON077分别转染入野生型Hep3B细胞（以下简称WT）。然后利用含7.5μg/mL嘌呤霉素的细胞培养液，对细胞进行持续筛选5天，再用含3.5μg/mL嘌呤霉素的细胞培养液继续维持2天，即可获得稳定敲减CYP3A4基因的细胞系。最后观察细胞CYP3A4表达的状况以及生长增殖，探讨CYP3A4影响细胞生长的作用机制。本实验主要包括以下两个部分：　　1.利用Western Blot证实，Hep3B细胞经转染入CYP3A4-RNAi质粒后，与野生型细胞相比，转染组细胞中CYP3A4的表达下降，其中18297组下降最明显。因此选取野生型Hep3B细胞、转染质粒18297、乱序质粒CON077的细胞进行后续试验。CCK-8实验检测转染组18297、CON077细胞的增殖速率分别为野生型的0.59倍、0.94倍，转染组18297的细胞增殖明显受到抑制(P<0.05)。细胞划痕实验检测细胞迁移发现，三组细胞的迁移速率没有显著差异。　　2.通过分析其微核、核芽、核异常的变化来衡量稳定敲减CYP3A4对肝癌细胞遗传物质稳定性产生的影响。结果显示，18297组的微核率分别是野生型、CON077 组的2.6和2.68倍，18297组与野生型、CON077组之间的微核率具有显著性差异(P<0.05)。18297组细胞核芽率分别是野生型、CON077组的0.84倍和1.72倍。通过单因素方差分析，它们之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，说明三种细胞核芽率发生显著性变化。野生型、18297、CON077细胞的核异常率分别为4.2％、4.2％、3.875％。通过单因素方差分析，它们之间的差异无统计学意义(P>0.05)，说明三种细胞的核异常率没有发生显著性变化。