电刺激大鼠杏仁核颞叶癫痫持续状态模型海马区KIF-5a的表达及意义

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目的:癫痫是中枢神经系统常见性疾病,全球发病率百分之一。目前应用抗癫痫药物能对绝大多数癫痫患者有效。但约1/3患者仍对抗癫痫药物不敏感。其中颞叶癫痫作为最常见的难治性癫痫,其发病机制一直是癫痫研究的热点。神经系统常见的抑制性递质γ-氨基丁酸(GABA),通过脑内的γ-氨基丁酸受体作用达到其功能。在抑制颞叶癫痫的形成和发展起着非常重要的作用。驱动蛋白家族成5A(KIF-5A)在成年脊椎动物神经系统中表达广泛,在神经细胞中沿微管向胞膜运输γ-氨基酸受体的A亚型。但KIF-5A是不是参与了颞叶癫痫病理形成还未得知。本实验通过制备一次性持续电刺激大鼠颞叶癫痫模型,定量监测癫痫发作后不同时相点KIF-5A蛋白在海马区表达随时间变化规律,探讨KIF-5A是否参与颞叶癫痫病理特点机制的形成,为临床治疗颞叶癫痫提供依据。方法:成年wistar大鼠120只编号随机分四组.空白对照组:不做任何处理;未刺激对照组:只插入电极,不做任何其它处理;发作组:电刺激大鼠杏仁核后能观察到具有稳定的自发性反复发作的wistar大鼠归为发作组;未发作组:将电刺激大鼠杏仁核后未观察到具有稳定的自发性反复发作的wistar大鼠归为未发作组。其中随机抽取8只大鼠为空白对照组,16只大鼠为未刺激组,其余随机分为发作组和未发作组。将四组分为15d、30d两个亚组,将每个亚组随机抽取符合条件wistar大鼠8只。在电刺激后15d、30d两个时间点统一处死动物,以R15、R30表示在两个时间点进行荧光定量PCR反应,以I15、I30表示在两个时间点进行免疫荧光检测。结果:1.创建大鼠颞叶癫痫模型成功。2.各组KIF-5A荧光免疫反应情况:空白对照组海马区的KIF-5A呈高表达状态。分别在15d、30d时,未刺激组KIF-5A荧光染色阳性细胞多,与空白组相比较,差异不具有统计学意义(P>0.05);与未发作组和发作组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);在15d和30d时,未发作组和发作组可见海马区KIF-5A荧光染色阳性细胞较少;与空白组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05);发作组与未发作组之间相比较,存在统计学意义(P<0.05);15d和30d时,空白对照组及未刺激组组内比较,差异无统计学意义(P>0.05);发作组在15d和30d时,尽管阳性细胞数减少,但比较差异不明显,无统计学意义(P=0.17>0.05);未发作组在15d和30d时,随时间延长阳性细胞数减少,但比较差异不明显,无统计学意义(P>0.05)。3.各组KIF-5A mRNA在不同时间点的相对表达量:以空白对照组△CT值作为基因相对表达量为参照。分别在15d和30d时,发作组和未发作组相应的KIF-5A mRNA相对表达量较空白对照组和未刺激组明显低,存在统计学意义;空白组和未刺激组相比,差异不具有统计学意义;发作组和未发作组比较,差异具有存在统计学意义;发作组在30d时,KIF-5A mRNA表达较15d时表达减少,差异存在具有统计学意义;未发作组在30d时,KIF-5A mRNA表达较15d时尽管表达减少,但组内差异不明显,差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论:1.在电刺激大鼠杏仁核癫痫持续状态后颞叶癫痫模型中,大鼠海马区KIF-5A表达量均降低。2.KIF-5A在颞叶癫痫的形成机制及发展中可能起重要作用
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