miR-19b-1作为肿瘤的致癌基因在肾癌中的功能研究

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目的:肾癌是我国泌尿系最常见的恶性肿瘤,约占成年人恶性肿瘤2-3%。目前,关于肾癌发生、发展的分子机制尚未完全明确。近年来的研究发现有一类miRNAs可以调控多种恶性肿瘤的发生发展。多项研究表明,miR-19b-1在乳腺癌、肝癌、肺癌等肿瘤中存在异常表达。然而目前关于miR-19b-1在肾癌中的表达、作用机制及功能尚未研究。本实验旨在探究miR-19b-1在肾癌中的表达水平及功能,分析miR-19b-1做为肾癌生物标记物应用于临床的可能性。方法:随机选择32对肾癌与配对癌旁组织以及正常人胚肾细胞系(293T)和肾癌细胞系(786-O、ACHN)作为标本,提取标本中的总RNA,经逆转录、RT-qPCR实验检测miR-19b-1在组织间及细胞系之间的表达,使用统计软件分析miR-19b-1在组织间及细胞系之间的表达差异。将患者以配对组织△△CT平均值分为高表达组和低表达组,利用Fisher确切概率法分析miR-19b-1的表达水平与患者年龄、性别、肾癌组织类型及临床分期的相关性。对肾癌细胞系转染miR-19b-1功能类似物(上调)或功能功能抑制物(下调),改变肾癌细胞系中miR-19b-1的表达水平,通过划痕实验、增殖实验(MTT和CCK-8)、Transwell迁移及侵袭实验、流式细胞术、Hoechst33342染色等实验研究miR-19b-1对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响,探讨miR-19b-1在肾癌细胞系中的功能。结果:RT-qPCR结果显示:miR-19b-1在肾癌组织和肾癌细胞系中的表达显著高于癌旁正常组织及正常肾细胞系(p<0.05)。本实验未发现miR-19b-1的表达水平与患者年龄、性别及肾癌组织类型具有相关性,但miR-19b-1在肾癌临床分期较高的肾癌组织中表达水平会更高(p<0.05)。通过转染miR-19b-1功能类似物或功能抑制物可明显上调或下调miR-19b-1在肾癌细胞系中的表达水平。增值实验(CCK-8、MTT)的结果显示:肾癌细胞系(786-O)为阴性,但是肾癌细胞系(ACHN)为阳性。划痕实验及Transwell迁移、侵袭实验结果显示,miR-19b-1的功能类似物可促进肾癌细胞系迁移和侵袭,而功能抑制物则抑制肾癌细胞系迁移和侵袭。流式细胞术结果显示:在肾癌细胞系(786-O)中,miR-19b-1功能类似物及功能抑制物对细胞凋亡无明显影响;而在肾癌细胞系(ACHN)中,miR-19b-1功能抑制物(inhibitor)可促进细胞凋亡,相对于对照组(inhibitor NC),其凋亡比例约为44.05%VS 37.87%(p<0.05);miR-19b-1功能类似物(minic)可抑制细胞凋亡,相对于对照组(minic NC),其凋亡比例约为30.54%VS 40.03%(p<0.05)。结论:与癌旁正常组织相比,miR-19b-1在肾癌组织中表达明显升高。与正常肾癌细胞相比,肾癌细胞系(786-O和ACHN)中的表达水平也明显升高。且miR-19b-1的表达水平和肾癌分期相关,在分期较高的肾癌患者组织中miR-19b-1的表达水平升高更明显。肾癌细胞系(786-O)为在增值实验(CCK-8、MTT)中为阴性,但是肾癌细胞系(ACHN)在增值实验(CCK-8、MTT)中为阳性。下调miR-19b-1可明显抑制肾癌细胞(786-O)迁移、侵袭,但对肾癌细胞系凋亡无明显影响,上调miR-19b-1表达可促进肾癌细胞(ACHN)迁移、侵袭,且上调miR-19b-1可促进肾癌细胞的凋亡。本实验结果表明,miR-19b-1在肾癌组织及细胞系表达异常,可调控肾癌细胞的功能,且和肾癌临床分期相关。因此miR-19b-1在肾癌的发生发展中起着很重要的作用,有作为肾癌肿瘤标记物应用于临床的可能。
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