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细胞色素P450(cytochromeP450,CYP450)是昆虫体内三大解毒酶系之一,在昆虫体内参与内源激素的合成和外源化合物的解毒代谢。本研究采用RNA干涉(RNAinterference,RNAi)技术,通过注射合成的斜纹夜蛾CYP6847和CYP32181双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),研究斜纹夜蛾幼虫的CYP6847和CYP321B1被沉默后对花椒毒素、香豆素和黄酮等3种植物次生物质解毒能力的影响,主要结果如下: 一、注射CYP6847和CYP321B1dsRNA对斜纹夜蛾生长的影响 与对照相比,饲喂毒素并注射CYP6847和CYP321B1dsRNA使斜纹夜蛾幼虫体重增重和蛹重显著降低,且在预化蛹和化蛹及成虫阶段出现很高死亡率,但对化蛹时间无显著影响。 二、CYP6B47和CYP321B1 dsRNA在斜纹夜蛾中的干涉效率 与对照组相比,注射CYP6847 dsRNA使斜纹夜蛾中肠和脂肪体中CYP6847的相对表达量分别显著减低了79.3%和77.3%。注射CYP321B1dsRNA使斜纹夜蛾中肠和脂肪体中CYP321B1的相对表达量分别比对照组显著减低了75.4%和73.6%,而DEPC处理对CYP6B47和CYP321B1相对表达量均无影响。 三、植物次生物质对斜纹夜蛾CYP6B47和CYP321B1基因表达的影响 与对照相比,斜纹夜蛾取食含有花椒毒素的人工饲料48 h后,其中肠和脂肪体中CYP6847相对表达量分别显著增加18.5倍和14.2倍;取食含有黄酮的人工饲料48 h后,其中肠和脂肪体中CYP6847表达量分别比对照显著提高21.7倍和6.4倍,而取食香豆素对CYP6B47表达量无显著影响。而斜纹夜蛾中肠和脂肪体CYP321B1相对表达量结果与类似。 四、注射CYP6B47和CYP321B1 dsRNA对CYP6B47和CYP321B1表达的影响。 在花椒毒素实验中相比毒素对照,注射CYP6B47 dsRNA使斜纹夜蛾中肠和脂肪体中CYP6847表达量分别减低71.7%和52.9%,注射CYP321B1 dsRNA使斜纹夜蛾中肠和脂肪体中CYP321B1的表达量分别显著减低了62.5%和52.8%。香豆素和黄酮实验取得类似结果。 五、注射CYP6B47和CYP321B1 dsRNA对斜纹夜蛾CYP9A39表达的影响。 斜纹夜蛾注射CYP6B47 dsRNA后取食含有花椒毒素的人工饲料,使其中肠CYP9A39表达量比对照显著增加8.1倍;注射CYP6B47 dsRNA和CYP321B1 dsRNA后取食含有黄酮的人工饲料,使其中肠CYP9A39表达量分别增加6.3倍和6.5倍;但香豆素处理各组间的中肠和脂肪体中CYP9A39表达量无显著差异。 综上所述,注射dsRNA可有效干涉CYP6847和CYP321B1基因表达,使斜纹夜蛾幼虫解毒3种植物次生物质能力显著下降。这3种植物次生物质也可诱导CYP6847和CYP321B1的表达。可见CYP6847和CYP321B1在斜纹夜蛾解毒宿主植物中次生物质中具有重要作用。