【摘 要】
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组织蛋白酶(Cathepsin)是存在于溶酶体中参与多种生理、病理过程的一类关键的酶超家族。本论文利用常规PCR和RACE-PCR方法,克隆出褶纹冠蚌(Cristaria plicata) CathepsinL (c
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组织蛋白酶(Cathepsin)是存在于溶酶体中参与多种生理、病理过程的一类关键的酶超家族。本论文利用常规PCR和RACE-PCR方法,克隆出褶纹冠蚌(Cristaria plicata) CathepsinL (cpCathL)和CathepsinB (cpCathB)的cDNA全长以及cpCathL的基因组序列。运用荧光定量PCR技术检测了cpCathL和cpCathB的mRNA在不同组织中的表达及嗜水汽单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激后在肝胰腺、血细胞和鳃组织中的表达变化。1.克隆了褶纹冠蚌cpCathL和cpCathB的cDNA全长。cpCathL cDNA全长1144bp, ORF1002bp,编码333个氨基酸,分子量为37.65KDa,理论等电点8.61。基因组序列长度为9353bp,包括7个外显子和6个内含子。cpCathB cDNA全长1825bp,ORF为1044bp,编码347个氨基酸,分子量为38.55KDa,理论等电点5.77。二者的氨基酸序列均由信号肽、前体肽和成熟肽组成,均含有三个活性位点Cys、His和Asn,均存在N-糖基化位点。2. CathL和CathB的mRNA在褶纹冠中呈组成型分布。二者在肝胰腺中表达量最大。嗜水气单胞菌刺激后,与对照组相比,cpCathL mRNA在褶纹冠蚌血淋巴和肝胰腺中上调表达,在鳃中表达下调；cpCathB mRNA在血淋巴和肝胰腺表达量上调,在鳃cpCathB mRNA表达量无显著差异。3.成功构建了cpCathL和cpCathB重组质粒并获得了高效表达,制备了cpCathL和cpCathB高效价的多克隆抗体,最高效价分别是1：1280000和1：640000.
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