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研究背景糖尿病视网膜病变（Diabetic Retinopathy,DR）是患者致盲的主要原因之一,其确切的发病机制尚不清楚,目前认为是多种因素协同作用的结果。在过去的几十年来对这种高葡萄糖导致的疾病的认识有很大的进展,但脂代谢紊乱在糖尿病微血管病变中的作用机制目前尚不清楚。临床观察表明脂代谢紊乱与糖尿病视网膜病变有密切关系,因此研究其作用机制就显得尤为重要。DR的病理改变包括毛细血管闭塞,微动脉瘤形成,血管壁内周细胞的选择性丧失,基底膜的增厚和新生血管形成。在DR中,视网膜微血管内皮细胞、Muller细胞、神经节细胞、周细胞通过凋亡而丧失,这种情况在DR的早期就可出现,目前国内外还未见有关脂代谢紊乱与视网膜内皮细胞凋亡关系的相关报道。新生血管形成与视网膜缺血关系密切,生长因子在其病理过程中起重要作用。缺血的视网膜能分泌生长因子,刺激残存的血管增殖。脂代谢紊乱导致DR的分子机制目前仍不清楚。TGF-β与内皮细胞的增殖、黏附和细胞外基质的聚积有关。在哺乳动物中,TGF-β有三种异构体,命名为TGF-β1、TGF-β2、TGF-γ3。TGF-β在眼组织中有广泛表达,其中在视网膜组织中主要表达TGF-β2。TGF-β作为一种具有双相功能的生长调节子,其刺激或抑制增殖的作用依赖细胞的培养条件、TGF-β的浓度及其他协同调节的细胞因子。TGF-β通过调节内皮细胞的增殖、移行,促进血管腔的形成和成熟而参与新生血管形成。TGF-β通过与靶细胞表面的特异受体结合而发挥生物效应。细胞有表面的二种TGF-β受体（TβRⅠ、TβRⅡ）,这二种受体的跨膜丝氨酸/苏氨酸部分通过形成受体复合物参与TGF-β的信号通路,从而调节TGF-β的效应,Ⅱ型受体的激酶活性是信号传导所必需的。目前还未见有关脂代谢紊乱对视网膜TGF-β2及其Ⅱ型受体影响的相关报道。基于上述原因,本研究探讨脂毒性对视网膜TGF-β2、TβRⅡ表达及内皮细胞凋亡的影响。第一章:高脂喂养对糖尿病大鼠视网膜TGF-β2与TβRⅡmRNA表达的影响目的:探讨高脂喂养的糖尿病大鼠视网膜中TGF-β2及TβRⅡmRNA的表达。方法:应用RT-PCR方法检测高脂喂养的糖尿病大鼠视网膜中TGF-β2及TβRⅡmRNA的表达水平。结果:糖尿病大鼠视网膜中TGF-β2 mRNA的表达高于非糖尿病大鼠视网膜（P＜0.01）;高脂喂养的糖尿病大鼠视网膜中TGF-β2 mRNA的表达高于普通喂养的糖尿病大鼠视网膜（P＜0.01）;TβRⅡmRNA的表达水平在非糖尿病大鼠视网膜与糖尿病大鼠视网膜间比较无明显差异;高脂喂养的糖尿病大鼠视网膜中TβRⅡmRNA的表达水平与普通喂养的糖尿病大鼠间比较亦无明显差异。结论:高脂喂养的糖尿病大鼠视网膜中TGF-β2 mRNA的表达水平升高。高脂喂养对糖尿病大鼠视网膜中TβRⅡmRNA的表达无影响。第二章溶血卵磷脂对牛视网膜微血管内皮细胞凋亡的影响目的:探讨溶血卵磷脂（LPC）对牛视网膜微血管内皮细胞（BRECs）凋亡的影响。方法:视网膜微血管消化分离后,采用含20%胎牛血清、5%PPP和20μl/ml视网膜浸出液的DMEM培养基,结合原代细胞的分离、除杂培养BRECs。培养的BRECs中加入不同浓度的LPC（0～60umol/L）,分别培养6小时、12小时、24小时,通过吖啶橙染色在荧光显微镜下观察细胞凋亡,流式细胞检测细胞凋亡率,F2000荧光分光光度计测细胞内钙离子浓度并计算游离钙浓度。结果:（1）含20%FBS的DMEM培养基中加入5%PPP及20μl/ml的视网膜浸出液,结合原代细胞克隆的分离、除杂,可获得较纯净的BRECs;（2）LPC浓度为60 umol/L作用BRECs 24小时后,BRECs凋亡率明显高于LPC浓度为20umol/L及40umol/L时;LPC浓度从20umol/L增加到60umol/L过程中,细胞内游离钙离子浓度明显增加,而且细胞内游离钙离子浓度的增加与LPC的作用时间有关,作用时间越长,钙离子浓度越高。结论:（1）通过选择性培养能获得高纯度的BRECs,并能连续传代;（2）LPC能增加细胞内游离钙离子浓度,促使BREC的凋亡,而且LPC的这种作用具有时间和剂量依赖性。第三章:LPC对牛视网膜微血管内皮细胞TGF-β2与TβRⅡmRNA表达的影响目的:探讨不同浓度的LPC对牛视网膜微血管内皮细胞TGF-β2与TβRⅡmRNA表达的影响。方法:原代分离、培养牛的视网膜微血管内皮细胞,加入不同浓度的LPC（0～60umol/L）,分别培养6小时、12小时、24小时,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA表达水平,半巢式RT-PCR检测TβRⅡmRNA的表达水平。结果:RT-PCR结果表明,LPC浓度为40umol/L作用12小时后,TGF-β2 mRNA水平明显高于LPC浓度为20 umol/L和60umol/L;LPC浓度改变对TβRⅡmRNA的表达无明显影响。结论:LPC能调节牛视网膜内皮细胞TGF-β2的表达;LPC对牛视网膜内皮细胞TβRⅡ的表达无明显影响;