肉苁蓉总苷对帕金森病大鼠纹状体细胞外液中单胺类神经递质含量的影响

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目的:建立基于脑微透析(BMD)和高效液相-电化学检测法(HPLC-ECD)的实验方法;制作6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤致急性帕金森病(PD)大鼠模型;研究肉苁蓉总苷(GCs)对6-OHDA损伤致急性PD模型大鼠纹状体细胞外液中单胺类递质含量的影响,以探讨其对脑神经保护作用的可能机制。方法:40只雄性Wistar大鼠分为三批,第1批5只用于BMD和HPLC-ECD实验方法的建立,按照A:+0.2mm、L:+3mm、V:3.5mm的坐标定位至大鼠右侧纹状体,次日通过微透析(灌流速度1.5μl·min-1,每20min收集一管)收集透析液并将其注入高效液相-电化学检测器(HPLC-ECD)测定各组大鼠透析液中多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量,以确定实验方法是否可行。第2批10大鼠在BMD和HPLC-ECD实验方法建立的基础上,随机分为对照组和模型组各5只,按照前述坐标定位至大鼠右侧纹状体,然后向模型组大鼠右侧纹状体内注入6-OHDA 12μg/4μl(用含0.1%抗坏血酸的0.9%氯化钠溶液配制)制作急性PD模型,对照组大鼠同一部位注射等量生理盐水。于注入后第7天插入微透析探针收集透析液并将其注入HPLC-ECD测定各组大鼠透析液中DA、DOPAC和HVA的含量。经分析确定模型成功后,将第3批25只大鼠随机分为对照组、模型组、GCs大剂量组、GCs小剂量组和美多巴(MD)组。对照组纹状体内注射等量生理盐水,其余各组均注射6-OHDA,剂量同前述。术后按下述剂量分别腹腔注射给与不同药液,连续给药7天,每日一次:对照组:蒸馏水2ml·kg-1;模型组:与对照组等量蒸馏水,所用蒸馏水与对照组为同一批次制备而成;GCs小剂量组:剂量为3.5m/2ml·kg-1;GCs大剂量组:剂量为7.0mg/2ml·kg-1;MD组:剂量为13mg/2m1·kg-1。于第7天进行微透析试验,将透析液注入HPLC—ECD测定各组纹状体细胞外液中DA、DOPAC和HVA的含量,分析比较测定结果。结果:基于BMD和HPLC-ECD的实验方法可成功测定大鼠纹状体细胞外液中DA、DOPAC和HVA的含量;与对照组相比,模型组动物纹状体细胞外液中DA、DOPAC和HVA含量均显著性降低(p<0.001);而GCs大剂量组、GCs小剂量组和美多巴(MD)组三种物质的含量则明显高于模型组,两两相比具有统计学意义(p<0.05,P<0.01或P<0.001)。结论:基于BMD和HPLC-ECD的实验方法具有较强可行性:采用6-OHDA可以成功制作急性PD大鼠模型;GCs对6-OHDA急性损伤所致大鼠纹状体细胞外液中的DA及其代谢产物DOPAC和HVA含量减少具有较好的预防作用,可能用于PD的防治。
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