【摘 要】
：
目的:以大黄酸衍生物4B为研究对象,探究4B诱导卵巢癌SKOV3与SKOV3/DDP细胞死亡的主要机制及其通过靶向RAC1蛋白对侵润转移的影响。方法:1.采用酶标仪检测衍生物4B的激发及发射光谱、激光共聚焦显微镜观察衍生物4B在细胞的分布;利用MTT法测定衍生物4B的抗肿瘤活性和细胞毒性;HE染色观察细胞形态学;生长曲线和克隆形成检测细胞增殖。2.采用ER-Tracker Red染色、透射电镜观察
【基金项目】
：
项目名称:大黄酸衍生物A调控RAC1/confilin信号通路抑制卵巢癌淋巴结细胞定向转移的作用及干预靶点确认,项目合同编号:NO.81360502,国家自然科学基金,项目起止时间:2018.09-2019.04； 项目名称:大黄酸衍生物A调控RAC1/confilin信号通路抑制卵巢癌淋巴结细胞定向转移的作用,项目合同编号:2014GXNSFAA118161,广
论文部分内容阅读
目的:以大黄酸衍生物4B为研究对象,探究4B诱导卵巢癌SKOV3与SKOV3/DDP细胞死亡的主要机制及其通过靶向RAC1蛋白对侵润转移的影响。方法:1.采用酶标仪检测衍生物4B的激发及发射光谱、激光共聚焦显微镜观察衍生物4B在细胞的分布;利用MTT法测定衍生物4B的抗肿瘤活性和细胞毒性;HE染色观察细胞形态学;生长曲线和克隆形成检测细胞增殖。2.采用ER-Tracker Red染色、透射电镜观察细胞超微结构;加入内质网应激抑制剂4-PBA后细胞存活率检测;流式检测细胞周期和细胞凋亡;WB实验检测内质网应激通路主要蛋白及自噬LC3II/LC3I、P62、Beclin-1相关蛋白变化以及凋亡PARP相关蛋白表达水平改变。3.细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;分子对接模拟衍生物4B与RAC1蛋白的相互作用;萤光素酶报告基因实验验证衍生物4B对RAC1基因的调控作用;WB实验验证衍生物4B对RAC1蛋白的表达调控,检测与侵润转移相关的MMP-2与MMP-9蛋白的表达。结果:1.衍生物4B具有刚性共轭结构,可自发荧光,最大发射波长在511nm处;衍生物4B易进入细胞,主要分布在胞质和细胞核周围;衍生物4B对细胞的抑制作用呈浓度依赖性,可抑制肿瘤细胞增殖,其IC50值均低于10μmo/L;衍生物4B作用SKOV3、SKOV3/DDP和正常细胞IOSE80 48h后,IC50值分别为3.68±0.71μmol/L、3.54±0.37μmol/L、5.00±0.18μmol/L;衍生物4B对正常卵巢细胞IOSE80的细胞毒性相对于SKOV3与SKOV3/DDP细胞较小。HE染色发现衍生物4B作用细胞后,在细胞周围出现空泡,细胞生长曲线显示在衍生物4B处理SKOV3及SKOV3/DDP细胞时,细胞增殖被明显抑制,低于Control组（P＜0.05）;克隆形成实验表明衍生物4B可减少细胞集落形成,相同浓度的情况下,衍生物4B抑制细胞集落的形成,能力优于大黄酸。2.ER-Tracker Red染色发现4B引起的空泡来源于内质网;电镜结果显示4B处理SKOV3、SKOV3/DDP细胞后,细胞结构仍完整,细胞内质网、线粒体肿胀,胞质空泡,可见凋亡小体;内质网应激抑制剂4-PBA联合4B可显著抑制细胞空泡产生及降低细胞死亡率;流式细胞术显示4B对细胞周期分布无明显影响;可检测到细胞凋亡率呈浓度依赖性增加;4B可升高SKOV3及SKOV3/DDP细胞中内质网蛋白GRP78、PERK、ATF6表达水平（与Control组比较,P＜0.05）,自噬相关的LC3II/LC3I、P62、Beclin-1蛋白表达均升高（P＜0.05）,凋亡PARP蛋白在高浓度时出现剪切型。3.大黄酸及衍生物4B作用SKOV3与SKOV3/DDP细胞后细胞迁移及侵袭能力被抑制,且衍生物4B的作用明显强于大黄酸;基质金属蛋白MMP-2和MMP-9表达降低,分子对接显示,Rhein、大黄酸衍生物4B及RAC1抑制剂NSC23766与RAC1蛋白的结合能分别为-13.3689Kcal/mol、-20.2826Kcal/mol、-15.4279Kcal/mol;WB结果显示SKOV3/DDP细胞表达水平高于SKOV3细胞,同时,衍生物4B能明显抑制SKOV3、SKOV3/DDP细胞中RAC1蛋白表达（P＜0.05）;萤光素酶报告基因实验显示衍生物4B可以靶向抑制SKOV3细胞中RAC1的表达。结论:1.大黄酸衍生物4B是易进入细胞并具有良好抗卵巢癌活性的新型蒽醌化合物;衍生物4B可抑制卵巢癌SKOV3与SKOV3/DDP细胞增殖,作用优于大黄酸,对正常细胞毒性小,表明对大黄酸的结构改造有效。2.衍生物4B诱导卵巢癌细胞死亡的形态学变化与内质网应激的特征一致。内质网应激的ATF6通路可能是衍生物4B诱导SKOV3和SKOV3/DDP细胞死亡的关键通路,4B可诱导内质网应激介导的SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡。3.4B可抑制SKOV3和SKOV3/DDP细胞的浸润和转移,能抑制SKOV3和SKOV3/DDP细胞中RAC1基因和蛋白的表达,4B可能是RAC1蛋白小分子抑制剂。
其他文献
目的①探究经化疗的肿瘤重症患者发生应激性高血糖的危险因素。②探究经化疗的肿瘤重症患者应激性高血糖和胰岛素抵抗的相关性。③探究早期肠内营养对经化疗的肿瘤重症患者高血糖状态和胰岛素抵抗的影响。方法①回顾性收集广西医科大学附属肿瘤医院重症医学科2018年1月至2021年1月收治的经化疗的肿瘤重症患者的临床资料共83例。分组:按患者入住ICU期间是否发生应激性高血糖分为应激性高血糖组（SRH组）和正常血糖
研究目的:在呼吸机相关性肺损伤中,肺泡过度膨胀可引起长时间的无菌性炎症反应。在我们课题组先前的研究中发现,内质网应激导致的无菌性炎症参与呼吸机相关性肺损伤发生,然而内质网应激是如何引起的尚不清楚。Toll样受体4（TLR4）激活在机械通气引起的肺内及全身炎症反应起重要作用,但是内质网应激是否由TLR4信号通路激活所引起并参与呼吸机相关性肺损伤的发生目前尚不可知。本研究旨在探索呼吸机相关性非损伤模型
目的:目前的研究表明,KRAS（Kirsten rat sarcoma viral oncogene,Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因）突变及其亚型和晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的疾病进展风险及死亡风险是否存在关联仍存在争议,且KRAS不同突变亚型对一线治疗方案的反应可能是不同的,本研究旨在提供进一步数据支持,为临床决策提供循证医学证据。方法:
研究目的:本研究从AFP阴性HCC的m RNA测序中筛选出显著高表达的m RNA载脂蛋白L1基因（APOL1）,探究其蛋白产物apo L1在AFP阴性癌组织中是否高表达,并探究血清apo L1作为AFP阴性HCC辅助诊断标志物的可能性。研究方法:收集5例中国广西地区AFP阴性HCC患者癌组织以及癌旁组织标本,通过高通量RNA测序手段检测样本中的m RNA表达谱,后通过基因本体论数据库（GO）、京都
＜正＞山西传媒学院是山西省人民政府和国家广播电视总局共建高校,前身是原广播电视部1983年建立的华北广播电视学校。学校经过多年的办学探索与积淀,形成了"厚德博识励学躬行"的校训,"办人民满意的大学"的办学宗旨和"以人为本,立德树人,科学发展"的办学理念。
背景和目的:乳腺癌综合治疗的目的最终都是为了改善患者的预后情况,临床多沿用肿瘤形态学特征及病理学分期来评估患者的预后情况,常见指标包括:肿瘤大小、有无淋巴结转移、组织学分级及病理TNM分期等。随着分子生物学技术的不断进步,乳腺肿瘤的分子分型极大提高了乳腺癌临床诊疗和预后评估的有效性和精准性。肿瘤突变负荷（Tumor mutation burden,TMB）是量化体细胞累积突变的一个概念,在多种肿瘤
目的:通过观察结直肠癌原发灶大病理组织切片,分析原发灶不同区域肿瘤细胞分布及组织形态学的特点,检测不同区域分子标志物表达的规律,探讨研究结直肠癌浸润转移的组织形态学特点及其可能的生物学机制。方法:收集自2016年1月至2019年12月期间于广西医科大学附属肿瘤医院胃肠外科就诊的194例结直肠癌患者的手术切除标本,制备包括完整原发病灶和周边正常组织的大病理蜡块,并收集到配对结直肠癌上下切缘蜡块病例4
缺氧诱导因子1α（HIF1α）是糖酵解途径中的关键调控基因[1-4],而人肝X受体α（LXRα）则是脂质代谢途径中的关键调控基因[5-8]。从能量代谢角度而言,M1型巨噬细胞主要依赖糖酵解,M2型巨噬细胞则主要依赖脂质代谢[1,9]。因此,通过分析HIF1α和LXRα的转录/蛋白表达水平,有助于了解巨噬细胞极化表型[10]。在免疫相关弥漫性肺泡出血症（diffuse alveolar hemorr
目的:体外实验探讨鞣花酸（Ellagic acid,EA）分别联合奥拉帕尼（Olaparib,OLA）、顺铂（Cisplatin,DDP）对野生型BRCA三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖与凋亡的影响及可能的作用机制研究。方法:1.体外培养MDA-MB-231细胞,予不同浓度EA（10μg/m L、20μg/m L、40μg/m L、80μg/m L、160μg/m L）、OLA（10μm
目的:恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的重要疾病。传统的肿瘤治疗方式因较多的副作用不能让人们满意。近年来,声动力学疗法（Sonodynamic Therapy,SDT）作为一种新兴的非侵入性癌症治疗形式引起了广泛关注,其具有较高的组织穿透性,可以通过超声波激活积聚在深部肿瘤中的声敏剂,产生活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）以高效杀伤肿瘤细胞。本研究主要合成并表征了一种可以