珍稀植物连香树组织培养技术体系研究

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连香树(Cercidiphyllum japonicum Sieb. et Zucc.)为东亚著名孑遗植物,是国家二级珍贵树种和二级重点保护植物。连香树雌雄异株,结实少。种子细小,天然更新困难,在自然状态下已处于濒危状态。为保护这一珍贵植物资源,利用组织培养技术扩大其种群数量,是保护稀有和珍贵树种的有效手段。为探索连香树组织培养快速繁殖体系,本试验以连香树一年生带腋芽茎段、叶片、叶柄、芽、当年生带芽茎段、未成熟的种子作外植体,建立了以当年生带芽茎段和未成熟种子为外植体的组织培养体系,研究结果如下:1.当年生带芽茎段是良好的外植体材料。取材季节、取材部位、消毒时间等对启动培养的诱导率影响较大。6月份为最佳的取材季节,顶芽下第1-4芽是取材的较好部位。消毒灭菌用70%酒精10s,然后用0.1% HgCl6-8min为宜。尽管一年生带芽茎段的芽具有良好的萌发潜力,但因污染率较高,导致最终诱导率较低,仅为4.4%,故不是好的外植体材料。同样,越年生冬芽因污染率较高,诱导率仅为4.7%,也不是好的外植体材料。2.授粉后60d左右未成熟的连香树种子无休眠特性,在不加任何激素的MS培养基上能顺利萌发,萌发率达95%。在加有6-BA和NAA的培养基上,种子萌发后胚轴显著加粗,还能产生少量的愈伤组织。3.幼嫩的叶片、叶柄在适宜的培养基上能诱导产生愈伤组织。叶柄比叶片更容易诱导出愈伤组织,诱导率较高,最低的为66.7%,最高可达100%,随培养基激素水平的不同,愈伤组的颜色、质地有差别。叶柄诱导出愈伤组织所需的时间较短,但诱导的量比叶片少得多。4.培养条件以光照白天14h,温度26℃,夜晚10h,温度24℃,光强2000-3000lx为宜。5.当年生带芽茎段最佳启动诱导培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L,启动率可达98.2%;最佳继代增殖培养基为:1/2或1/3MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L,增殖系数可达5.3;生根培养基为:1/2MS或1/3MS+6-BA0.05 mg/L或0.1mg/L+IBA1.0mg/L或1.3mg/L,生根率可达90%。未成熟种子初代萌发最佳培养基MS+KT0.5mg/L,萌发率达95%;继代增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L或MS+6-BA0.5mg/L,增殖系数可达6.3;在生根培养基1/2MS+IBA1.0mg/L中,9d即可长出的短根,生根率达95%以上,根数为4-9条。6.连香树幼苗长至4-5cm时即可炼苗。移栽在到蛭石:珍珠岩为1:1的基质上,温度25-30℃,相对湿度80%,成活率可达95%。
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