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肝损伤是影响人类健康的最重要的常见病理现象之一。是各种急慢性肝病的必有病理现象。肝脏的特殊性使得各种肝病用药中以护肝药物最为常用。肝病药物的护肝效果一直是各种肝病药物研究中最普遍的。目前有各种动物模型可以应用,但这些模型都有一定局限性,且大多不易操作,不够稳定。本研究试图寻找更为理想的肝损伤模型,用二甲基亚硝胺一次性腹腔注射造成肝损伤模型,并用于评价中药的护肝效果。1 DMN致小鼠肝损伤剂量探索用3个DMN剂量对小鼠进行腹腔注射,分别为30mg/kg、20mg/kg、15mg/kg,结果30mg/kg组于12h-24h之间全部死亡;20mg/kg组于24-48h之间全部死亡;而15mg/kg组则在48h时只有1只死亡,至168h时仍有5只存活。因此以15mg/kg造模较为合适。2 DMN致小鼠肝损伤病理特点用15mg/kgDMN造模,后在6h、12h、24h、36h、48h、72h、120h分别取造模组小鼠4只处死取标本进行检测,结果DMN腹腔注射6h后,小鼠血清ALT即开始显著升高,从12h—48h这段时间,小鼠血清ALT活性处于高位。48h后则急剧降低,AST活性变化趋势与ALT基本一致。血清白蛋白水平在36h时开始明显下降,至120h时有回升趋势。但仍明显低于正常小鼠。DMN腹腔注射6h后,总蛋白即迅速下降,至36h时达到最低点。以后缓慢回升,但至120h时其血清总蛋白水平仍然明显低于空白组水平。正常组肝组织肝小叶结构正常,排列整齐,无出血,肝细胞无变性、坏死,未见脂肪沉积。造模6h时肝小叶结构仍然保持正常,但肝细胞出现大片空泡变性,血管周围肝细胞基本正常,变性主要位于血管与血管之间的肝实质:变性组织内有少量凋亡小体。变性组织内有轻微出血。造模12h时,变性组织空泡变性更加严重,且出现明显出血,个别组织部位有大片出血坏死灶,坏死灶边缘有大量炎细胞浸润。空泡变性组织内出现较多凋亡小体。造模24h时,肝组织遍布大片出血坏死灶,坏死灶内部肝小叶结构消失,但仍有部分肝细胞存活。存活的肝细胞大部分为双核细胞,在出血坏死灶的边缘出现大量炎细胞浸润,坏死灶内部也出现大量炎细胞浸润。也有部分肝组织仍然空泡变性,且出现较多凋亡小体。造模36h时,肝组织大片出血坏死灶更加密集地遍布于肝组织,坏死灶边缘出现较多空泡变性,并出现较多的大颗粒脂肪滴沉积于肝细胞。仍有较多炎细胞浸润,但较前为少,并有较多凋亡小体。造模48h时,肝组织出血坏死灶更加扩大,遍布于整个视野;有大量新鲜出血;大部分出血坏死灶内肝细胞结构完全消失,坏死灶边缘及内部有炎细胞浸润,但较前为少;部分肝组织出现大片肝细胞核固缩的凋亡细胞,但肝细胞膜完整,细胞结构清晰可见。造模72h时,出血坏死灶占据了大部分肝组织,在坏死灶周围出现了大量的双核肝细胞,坏死灶边缘及内部有炎细胞浸润,与前相当。仍有新鲜出血。仍有较多凋亡小体出现。造模120h时,仍然为遍布于大部分肝组织的出血坏死灶,但新鲜出血明显减少;仍有较少炎细胞浸润;但坏死灶周围大量肝细胞核深染,形态正常,提示大量肝细胞正在趋向凋亡。3 DMN致小鼠肝损伤肝组织表达损伤相关细胞因子mRNA动态变化利用前面实验收集的肝组织标本提取RNA并逆转录,然后用染料法荧光定量PCR检测Fas、TNF-α、MMP-2、MMP-3、MMP-9、JNK-1、JNK-2mRNA表达量,结果显示,TNF-αmRNA在该模型中的确升高明显,而FasmRNA则不明显。另外,JNK1、JNK2mRNA在该模型中也未见明显升高。另外,该模型肝组织MMP-2在造模后48小时之前其mRNA显著升高、而MMP-9mRNA则造模后一直升高。这是本模型的特点4中药复方对DMN致小鼠肝损伤模型护肝作用评价用DMN致小鼠肝损伤模型进行中药复方护肝效果评价,小鼠购回后适应性喂养2天,然后开始造模,造模同时开始分组给药,分为空白对照组、模型对照组、中药高剂量组(20g生药/kg.次)、中药中剂量组(10g/kg.次)、中药低剂量组(5g/kg.次)、联苯双酯组(150mg/kg.次),模型组灌胃生理盐水100ml/kg.次。每组10只。每12h给药一次,48h后采集标本,眼球采血,收集血清用于检测ALT、AST及白蛋白、总蛋白;将部分肝组织固定于多聚甲醛中以备HE染色。给药4次后发现,阳性对照组(联苯双酯)ALT、AST都显著下降,而其肝组织病理改善不甚明显;而中药高、中剂量组不但ALT、AST下降显著,且肝组织病理改善也非常显著,而中药低剂量组则ALT、AST及肝组织病理改善都不显著。这些实验结果表明,DMN致小鼠肝损伤模型完全可以用来评价中药的护肝效果,该模型具有造模简单,价格低廉,稳定性好,肝损害不易自行恢复的特点。