本项科研工作来源:自选课题。目的与基本方法:为了明确肾上腺结节的结构、功能及探讨其与肾上腺疾病的相关性,我们采用免疫组化及电镜标本生物体视学观察的方法,通过对正常肾上腺组织、肾上腺结节及肾上腺皮质腺瘤的3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)免疫组化染色、电镜标本的制作,比较其细胞染色的阳性率及细胞脂肪颗粒的体积密度(V_v)、表面积密度(S_v)、数密度(N_v),试图证明肾上腺结节与肾上腺疾病的相关性较低,从而为术前选择合适的患者奠定基础。对象与具体方法1、对象:2000年1月—2007年12月间肾上腺标本60例。其中包含20例电镜标本。40例石蜡包埋组织块。最后诊断为皮质增生与皮质腺瘤各20例,正常肾上腺(肾移植尸体供肾时收集)20例。2、方法:2.1 3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的免疫组化标本的制备:标本经10%福尔马林固定18-24小时,常规石蜡包埋,于肾上腺外周曲线明显扭曲处做连续切片,每张切片厚5um。1张作HE染色,1张作3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)免疫组化染色。2.2电镜切片的制备:将手术取出的肾上腺置于已预冷的操作台上,观察肾上腺大体结构,于肾上腺外周曲线明显扭曲处不同部位随机取3块组织,大小约0.5-1.0mm~3,固定、脱水、浸透、包埋后,用LKB Nova型超薄切片机切片,染色后用JEM-100CX型透视电镜进行观察。每张切片拍摄照片3张,要求随机拍摄。2.3电镜切片测量方法:使用电镜室测试网,大小为80mm×120mm,点间距(每小格长度)为5mm,测试网共有352个测试点,测试线总长为1760mm。测试时将测试网覆盖在电镜照片上,测试内容以脂肪颗粒为参照系。按计算公式计算测试脂肪颗粒的密度参数:体积密度(V_v)、表面积密度(S_v)、数密度(N_v)。2.4实验分组:(1)对照组:正常肾上腺20例(已包埋组织,作HE及免疫组化染色)。(2)肾上腺增生组:20例免疫组化染色,包含10例电镜标本。(3)肾上腺皮质腺瘤组:20例免疫组化染色,包含10例电镜标本。3、统计学方法:应用SPSS11.5软件系统分析,所有计量资料以均数±标准差((?)±s)表示,比较采用单向方差分析及两独立样本的t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。结果:1、肾上腺结节结构:(1)大体结构:肾上腺结节一般在切开腺体之前就能发现。结节多出现在包膜表面,扭曲了肾上腺原本平滑的外周曲线;(2)光镜下结构:结节性增生的部位束状带明显增厚,部分标本网状带也有不同程度的增厚;(3)电镜下结构:结节样增生最明显的细胞形态的特征是大的、苍白色脂粒占据细胞内的大部分空间。脂粒压迫线粒体和细胞核。内质网几乎全部消失,而高尔基体则几乎没有。2、3β-HSD免疫组化:睾丸组织作为阳性对照,PBS代替一抗作为阴性对照。阳性物均位于胞浆内,呈棕黄色。判断标准是阳性细胞数占细胞总数的百分比。比较肾上腺皮质结节增生、皮质腺瘤和正常肾上腺等不同病例皮质3β-HSD染色阳性细胞占细胞总数百分比之间的差异。肾上腺皮质腺瘤、皮质结节性增生和正常肾上腺中均可见3β-HSD染色阳性细胞,其中肾上腺皮质腺瘤染色阳性细胞百分比为36.8%,皮质结节性增生和正常肾上腺染色阳性细胞百分比分别为11.7%及13.6%,各组间均存在统计学差异(P＜0.05),结节性增生组与正常肾上腺组间的细胞阳性率也存在差异。3、电镜切片分析:3.1透视电镜下细胞形态学结节样增生最明显的细胞形态的特征是大的、苍白色脂粒占据细胞内的大部分空间。脂粒压迫线粒体和细胞核。内质网几乎全部消失,而高尔基体则几乎没有。腺瘤细胞的最明显的特征是大量内质网,线粒体的出现还有少量脂粒。在束状带和网状带的细胞中内质网的数量都大于普通细胞。在束状带是粗面内质网数量多,而在网状带则相反,滑面内质网的数量明显多于粗面内质网。高尔基体也较普通的皮质细胞显著增高。3.2两组细胞脂肪颗粒视学参数变化结节增生组与腺瘤组相比,V_v,S_v,N_v均小于腺瘤组,差异有显著意义。结论:1、根据3β-HSD结果,肾上腺结节与正常肾上腺的功能相近,与肾上腺疾病的相关性较低。肾上腺腺瘤的功能则明显异常,为许多肾上腺疾病的病因。这也解释了为什么临床上肾上腺腺瘤的手术效果很好,而许多肾上腺结节的患者术后仍存在高血压等症状。2、根据电镜切片分析,结节细胞内脂肪颗粒明显增多,呈现退行性变。而皮质腺瘤细胞内高尔基体、线粒体等细胞器明显较多,脂肪颗粒较少。再次说明肾上腺结节与肾上腺疾病的相关性较低。3、临床上部分肾上腺结节患者手术效果良好与本实验结果相矛盾。通过对肾上腺标本的观察得出三点可能原因。首先是部分结节性增生肾上腺可合并微腺瘤,手术切除腺瘤后得到良好效果。其次部分结节性增生患者合并髓质病变。还有部分结节患者合并肾上腺皮质的弥漫性增生。