论文部分内容阅读
本研究利用农杆菌介导法将从极度抗旱、耐盐植物柽柳中克隆得到的lea基因（lateembryogenesis abundant，）导入小黑杨花粉植株基因组中，通过对转基因小黑杨和非转基因对照小黑杨的盐、旱胁迫试验，比较它们抗性的强弱，筛选出抗性优良的转基因株系。对小黑杨花粉植株进行遗传转化，共获得11株卡那霉素抗性芽，对其进行PCR检测，结果均为阳性；进行PCR-Southern杂交，各转基因株系均出现杂交谱带，证明lea基因已整合到小黑杨花粉植株基因组中；进一步对11个株系进行Northern杂交和实时荧光定量RT-PCR检测，结果表明外源基因在RNA水平上得到表达。分别对11个转基因株系进行了NaCl胁迫和干旱胁迫试验，分析逆境胁迫条件下转基因小黑杨与非转基因对照小黑杨的丙二醛（MDA）含量、相对电导率、过氧化物酶（POD）活性、叶绿素含量、净光合速率等指标的变化，结果表明，在200 mmol．L-1NaCl处理6 d后，各转基因株系POD活性与对照之间无明显规律；平均MDA含量和质膜相对透性分别低于对照植株的14.4％和14.5％；平均净光合速率和叶绿素含量分别高于对照植株的140％和15.8％，综合耐盐性分析表明：耐盐性从强到弱分别为T11＞T1＞T14＞T6＞T3＞T10＞T5＞T13＞T4＞T9＞T7＞CK。综上说明，盐胁迫条件下，转基因小黑杨受害程度明显小于对照，抗盐能力强于对照。干旱胁迫处理7 d后，转基因小黑杨相对电导率平均低于对照小黑杨11.41％；平均MDA含量低于对照小黑杨17.71％；而此时POD活性与对照之间仍无明显规律；而转基因小黑杨的叶绿素平均含量为47.43 mg．g-1，高于对照的14.57％，平均净光合速率高于对照植株的31.5％，综合抗旱性分析表明：抗旱性从强到弱分别为T11＞T9＞T14＞T1＞T13＞T7＞T10＞T3＞T6＞T4＞T5＞CK。说明lea基因的导入提高了小黑杨的抗旱能力。综合以上结果，lea基因的表达能够不同程度提高转基因小黑杨的抗干旱、耐盐碱胁迫能力，其中T11抗性最强，T1、T14次之，其余各转基因株系的抗性也明显高于非转基因对照。