【摘 要】
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质粒pGEX1-AC2.1携带有HEV ORF2 3端6326~7149nt的序列,应用PCR的方法将该片段扩增出来,同时利用引物在目的片段的5端也加入了BamH Ⅰ酶切位点.PCR产物经TA克隆至载体pGEM-T-
【出 处】
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北京医科大学 北京大学医学部 北京大学
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质粒pGEX1-AC2.1携带有HEV ORF2 3端6326~7149nt的序列,应用PCR的方法将该片段扩增出来,同时利用引物在目的片段的5端也加入了BamH Ⅰ酶切位点.PCR产物经TA克隆至载体pGEM-T-Easy,构建了质粒pGTE-AC2.1,3端接入EcoR Ⅰ酶切位点.pGTE-AC2.1经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双切后,插入质粒pE<,AST>-B<,AC1>构建成重组供体质粒pF<,AST>B<,AC>-AC2.1.重组杆状病毒BacV-AC2.1转染Sf9细胞,传2-3代,收获表达的蛋白质.病毒感染后48h为收获的适宜时机.聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹法(Western-blot,WB)分析表明,重组杆状病毒BacV-AC2.1表达有分子量约为30kDa的HEV ORF2重组抗原,与抗HEV-IgG有较好的反应性.
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