J-蛋白是一个包含J-结构域的蛋白质家族,它的一些成员具有分子伴侣的功能。基因组序列分析表明,拟南芥中有90多种J-蛋白基因,其中大多数基因的功能还不知道。AtJ70是拟南芥J-蛋白家族的成员之一,关于它的特性、定位及功能还未见任何报道。本课题利用GUS和GFP报告基因的方法,研究AtJ70的组织特异性表达及亚细胞中的定位,旨在为AtJ70功能的研究提供线索和依据。用PCR的方法获得了AtJ70基因的启动子,构建了双元载体pCAMBIA1300 AtJ70 promoter:GUS,利用浸花法转化野生型拟南芥,获得了携带AtJ70 promoter:GUS融合基因的纯合体株系。对转基因植株的不同器官进行了GUS染色,结果表明:除了茎、花药、种子不被染色外,其它器官(根、叶、雌蕊、花丝、长角果)中AtJ70都有表达,其中维管组织及顶端分生组织表达较强。对不同发育时期的转基因幼苗进行GUS染色,结果发现:3d、7d、10d的小苗中都有表达,其中7d的苗表达最强。对转基因植株不同时期的叶片、花染色发现,各个时期都有表达,但是随着植株的衰老,GUS着色逐渐变浅,表明AtJ70表达量下降。软件分析表明,AtJ70可能定位在细胞核中。本课题旨在通过转基因实验验证这一分析结果。用RT-PCR的方法获得了AtJ70基因的编码区序列,构建了含有融合基因AtJ70-mGFP4的双元载体,以浸花法转化拟南芥,获得了转基因植株。利用激光共聚焦扫描显微镜观察转基因植株的根部细胞,结果表明:在转空载体的根细胞中,GFP蛋白能够在细胞内普遍分布,而转AtJ70-mGFP4的根细胞和对照差异很大,荧光只分布在细胞核中。表明AtJ70可能定位于细胞核中,与信息学分析结果一致。