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兴安落叶松(Larix gmelinii)是我国东北地区主要的造林树种,近年来对其优良种源的需求逐渐增大。而由于其结实量不稳定且种子具有休眠特性,难以满足目前的生产需求。因此,本研究以成熟和未成熟合子胚为材料,系统研究了兴安落叶松胚性愈伤组织诱导的影响因素,以期确立高效、稳定的兴安落叶松胚性细胞系,并为其体胚发生体系的建立提供实验依据。主要结果如下:(1)以成熟合子胚为材料的诱导过程中发现,种源、培养基类型、激素种类、低温处理以及带胚乳与否,都对兴安落叶松胚性愈伤组织的诱导产生了明显的影响。内蒙种源诱导率显著高于加格达奇种源的诱导率(p<0.05),S培养基优于MS、DCR及其它几种培养基,2,4-D的诱导作用远大于NAA,经过低温处理(4℃,1个月)的成熟种子以及带胚乳培养都有利于诱导。(2)未成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导与外植体采集的时间关系密切。在6月中上旬取材的外植体诱导率为0;而6月下旬~7月上旬取材的外植体(即,处于前子叶期、子叶初期),胚性愈伤组织的平均诱导率高(33.92%,40.19%),且胚性愈伤组织状态好,7月下旬以后随着合子胚发育逐渐成熟,胚性愈伤组织的诱导率明显下降。(3)不同激素组合和浓度配比对胚性愈伤组织诱导率影响不同,且合子胚不同发育时期受激素作用的程度也不相同,处于胚胎选择时期的外植体,无论激素浓度是多少,胚性愈伤组织诱导率都是0,而前子叶期胚在1mg·L-12,4-D、0.1mg·L-1BA、0.5mg·L-1KT时达到最高的诱导率(53.71%)。试验还发现2,4-D起主要作用,但是BA、KT的加入可显著提高胚性愈伤组织的诱导率。此外,当琼脂浓度为4mg·L-1时,胚性愈伤组织的诱导率最高。(4)选择合适的继代时间对胚性愈伤组织的增殖影响也较大,当愈伤组织培养17~24d时,继代于琼脂浓度为5g·L-1的培养基中效果较好,时间过长可能使胚性愈伤组织失去胚性而不能进一步生长发育。增殖阶段仍就需要一定量的激素,首次继代培养在添加0.5mg·L-1、2,4-D、0.05mg·L-1 BA和0.25mg·L-1KT时效果最好,增长量可以达到1.5g,而后激素浓度降低至原来的的十分之一。若直接转接到无激素的培养基中,外植体将褐化死亡。(5)成熟培养基中加入适量浓度的ABA(2mg·L-1),胚性愈伤组织就会分化出柱状后期原胚。添加适量的PEG、肌醇也可以起到促进分化的作用,但是体胚的生长状态不好,也没有分化出子叶胚;ABA和PEG合用,无明显效果。将子叶形胚转移到不含任何激素的萌发培养基S中5~7d后,子叶由黄白色转变为绿色,且逐渐张开,下胚轴伸长,但生根情况不好。