【摘 要】
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目的:心血管疾病是严重影响糖尿病患者手术预后和并发症的危险因素之一。前期研究表明,七氟醚后处理（SPost C）通过HIF-1α对抗心肌缺血/再灌注损伤发挥保护作用,但在糖尿病状态下保护作用弱化。本研究旨在探索HIF-1α/MIF/AMPK信号通路在SPost C对高糖状态下心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用影响。方法:分别于低葡萄糖浓度（5μM）和高葡萄糖浓度（35μM）培养液中培养H9C2心肌细胞,
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目的:心血管疾病是严重影响糖尿病患者手术预后和并发症的危险因素之一。前期研究表明,七氟醚后处理（SPost C）通过HIF-1α对抗心肌缺血/再灌注损伤发挥保护作用,但在糖尿病状态下保护作用弱化。本研究旨在探索HIF-1α/MIF/AMPK信号通路在SPost C对高糖状态下心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用影响。方法:分别于低葡萄糖浓度（5μM）和高葡萄糖浓度（35μM）培养液中培养H9C2心肌细胞,并将细胞各分成5组,共10组:（1）空白组（N+CON组、H+CON组）;（2）缺氧/复氧组（N+H/R组、H+H/R组）;（3）七氟醚后处理组（N+H/R+SPost C组、H+H/R+SPost C组）;（4）抑制剂组（N+H/R+SPost C+YC-1组、H+H/R+SPost C+ISO-1组）;（5）激动剂组（N+H/R+SPost C+DMOG组、H+H/R+SPost C+MIF20组）。建立心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤模型,并在复氧开始前使用2.4%七氟醚进行15 min的后处理。通过检测细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）水平,细胞凋亡来确定细胞损伤情况;通过对活性氧（ROS）的生成,ATP含量和线粒体膜电位的检测来确定细胞能量代谢情况;通过RT-PCR检测HIF-1α,MIF和AMPKα的m RNA表达水平;通过Western blot测定HIF-1α,MIF,AMPKα和p-AMPKα的蛋白表达水平。在缺氧前40 min分别给予HIF-1α和MIF抑制剂和激动剂进行药物干预。结果:（1）在低糖状态下（5μM）,SPost C通过增加细胞存活率,降低LDH水平,减少细胞凋亡,对心肌细胞H/R损伤发挥保护作用;（2）在高糖状态下（35μM）,SPost C的心肌保护作用消失,表现为HIF-1α/MIF/AMPK信号通路的m RNA和蛋白水平的显著降低,伴有细胞活力降低、LDH水平和细胞凋亡增加、ROS生成增加、ATP合成减少、线粒体膜电位水平降低;（3）高糖状态下（35μM）,给予HIF-1α和MIF激动剂后,HIF-1α,MIF和p-AMPKα蛋白表达明显增加,SPost C的心肌保护作用得以恢复。结论:SPost C通过激活HIF-1α,促进MIF的释放,活化AMPK进而优化心肌能量代谢,发挥心肌保护作用;在高糖状态下,通过上调HIF-1α和MIF的表达可以恢复SPostC的心肌保护作用。
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