中药龟板化学成分调控干细胞增殖作用研究

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本文结合传统和现代的分离、分析方法,对促进鼠骨髓间质干细胞(MSCs)增殖的中药龟板提取物有效部位,经硅胶柱层析,石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱,得16个样品;GC-MS技术研究它们的化学组成;并用MTT法研究它们对MSCs的增殖作用,结果显示,Ts-2,Ts-3,Ts-11,Ts-12,Ts-16能促进MSCs的增殖(P<0.05);Ts-4对MSCs具有抑制作用,其它样品对MSCs的增殖作用不显著(P>0.05),不具统计学意义。根据GC-MS测定结果结合调控干细胞活性数据,预测龟板提取物中发挥主要作用的物质,并用HPLC和9个标准物质鉴定这些物质的存在。HPLC实验选取Ts-12和Ts-4,实验测得:组分Ts-12中含有十六酸甲酯(S-1),十六酸乙酯(S-3),十八酸甲酯(S-4),甾醇(S-7)及十四酸甾醇酯(S-8),组分Ts-4主要含有十八酸(S-5)。标准品采用MTT法和流式细胞仪研究了它们对rMSCs的增殖作用,结果表明十四酸甾醇酯和十六酸甲酯具有促进rMSCs增殖的作用,而十八酸具有抑制作用。为探求调控骨髓间质干细胞中药的共性,我们采用指纹图谱技术分析。根据生物活性结果和GC-MS测定的促进rMSCs增殖作用样品的总离子图的相似保留时间和相应峰面积,获得促rMSCs的增殖的指纹图;同样根据生物活性结果和GC-MS测定的抑制及无明显作用样品的总离子图的相似保留时间和相应峰面积,获得抑制rMSCs增殖的指纹图;用中药龟板提取物有效部位指纹图谱预测中药汤剂“四物汤”和“栽培红厚壳果仁”共七个样品。结果显示龟板活性部位指纹图谱预测其他中药活性正确率为86%,说明以生物活性为参照的指纹图谱具有科学性,为寻找相似活性的中药提供新思路。
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