有研究发现动物免疫口蹄疫灭活疫苗后,机体内抗口蹄疫病毒抗体水平与攻毒后动物的保护力之间存在密切联系。根据攻毒前机体内抗体水平与攻毒后动物保护力之间的关系可将抗口蹄疫病毒抗体水平进行分类,分别为:抗体白色区,即完全保护区,体内抗体水平很高,动物感染口蹄疫病毒后处于完全保护状态;黑色区,即完全不保护区,体内抗体水平很低,动物感染口蹄疫病毒后全部发病;灰色区,即部分保护区,体内抗体水平处于白色区和黑色区之间,动物感染口蹄疫病毒后,有些动物处于保护状态,而有些动物会发病。在灰色区内还会出现抗体水平高的动物会发病,而抗体水平较低的动物得到保护的现象。本研究的主要目的是探究抗体灰色区内动物保护力不同的机制。为探索口蹄疫免疫抗体灰色区形成的机制,本实验选取33头健康长白猪免疫自行制备的O型口蹄疫灭活疫苗,于免疫后28天进行同源强毒攻毒,随后连续观察十天确定动物发病情况。于免疫前及免疫后第28天采集血液样品进行试验,使用液相阻断ELISA测定血清中抗体水平,流式细胞术测定外周血中淋巴细胞亚群含量,抗体芯片技术测定血清中细胞因子含量。根据免疫后第28天时血清中抗体水平与攻毒后动物发病情况的关系,确定免疫抗体灰色区的范围。结果表明猪免疫口蹄疫灭活疫苗后,灰色区抗体效价的范围为1:6-1:45,灰色区动物在免疫前后CTL细胞含量及TNF-α、IFN-γ、IL-12、IL-15、IL-18、MIG、GM-CSF、IL-1α、TGF-α、TWEAK-R等细胞因子的含量均发生变化。灰色区内保护组动物免疫后CTL细胞含量与免疫前相比出现升高,而发病动物则出现显著性降低。对于IFN-γ、IL-12、GM-CSF、IL-1α、IL-15和TNF-α这几种细胞因子,其含量在灰色区保护组动物中免疫后与免疫前相比出现升高,而发病动物则没有发生变化或出现不同程度的降低。MIG和TWEAK R在保护组动物中免疫前后没有明显变化,但是发病动物其含量出现下降。而对于IL-18和TGF-α,保护组动物在免疫后其含量低于免疫前,不保护组动物IL-18的含量在免疫后反而出现上升,TGF-α的含量没有明显变化。实验结果显示,负责细胞免疫应答的CTL细胞及TNF-α、IFN-γ、IL-12和IL-15等Th1型细胞因子能够提高灰色区内动物抗口蹄疫病毒感染的能力,由此可得出免疫后诱导的细胞免疫应答强弱与口蹄疫抗体灰色区内动物保护力的高低有关。同时选用另外33头健康长白猪免疫口蹄疫灭活疫苗,观察整个免疫阶段外周血淋巴细胞亚群动态变化。分别于免疫前,免疫后第1、3、5、7、10、14、21、35天采集抗凝血,进行流式细胞术实验检测血液中细胞亚群的分布情况,同时测定血清中抗体水平。结果显示,在整个免疫期Th细胞含量变化与B细胞含量变化存在相关性,同时也与抗体水平的变化相关,这表明了Th细胞与B细胞之间存在相互作用的关系,共同介导体液免疫应答。DCs含量在免疫后快速升高,说明其在短期内即可被活化发挥功能。结果表明,疫苗免疫后DCs能快速发挥功能,使固有免疫应答朝着适应性免疫应答的方向发展。B细胞和Th细胞含量的升高说明体液免疫应答被激活,产生的高水平和高度特异性的抗体可对机体起到保护作用,同时CTL细胞含量也出现升高,说明细胞免疫应答在该过程中也发挥了至关重要的作用。