双膦酸盐对人肺腺癌细胞系A549体外增殖抑制及机理的研究

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目的:了解双磷酸盐对人肺腺癌A549细胞株增殖的影响,探讨伊班膦酸对人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的作用。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度伊班膦酸对A549细胞生长的抑制作用,荧光显微镜观察细胞形态变化并拍照;流式细胞仪分析细胞周期改变;以β-actin作为内参照,应用半定量RT-PCR检测不同药物浓度下细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达水平变化。结果:伊班膦酸对A549肺癌细胞的生长抑制率随时间和浓度的增加呈明显的上升趋势,在药物作用24h时,IC50值为(31±2.3)μmol/L ,在药物作用48h时,其IC50值为(5.8±1.2)μmol/L,表现出一定的剂量、时间依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05);不同药物浓度作用后,实验组随着药物浓度的增加,和作用时间的延长,贴壁细胞数量逐渐减少,飘浮细胞逐渐增多,呈晚期凋亡改变。在细胞周期测定中,当伊班膦酸浓度为20μmol/L时,G0/G1期比率达到峰值,继续增加药物浓度并不能增加G0/G1期比率,而G2/M期和S期比率逐渐下降,各实验组与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);半定量RT-PCR结果显示:A549细胞hTERT表达与对照组相比,随着药物浓度的增加逐渐减少,各实验组与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:伊班膦酸能有效抑制A549细胞的生长增殖,其机制可能与诱导细胞周期阻滞于G0/G1期和降低hTERT-mRNA表达有关。
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