炎症性肠病(InflammatoryBowelDisease，IBD)包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)，在中国的发病率较西方国家低，但近年来也有明显增高的趋势。IBD的发病机理尚不清楚，但普遍认为是由于易感人群的肠道粘膜对微生物抗原不正常免疫反应而造成的慢性炎症，其发病与遗传、环境及免疫反应异常有关。IBD的家族聚集性以及多个易感基因的发现都证明了遗传因素在IBD中的重要作用。 IBD属于复杂的多基因遗传疾病，用适合的遗传标记在家系中进行连锁分析或在病例-对照中进行关联分析寻找易感基因是研究复杂多基因遗传疾病的两个主要手段。自从1996年HugotJP等人用微卫星全基因组扫描及连锁分析的方法发现了第一个IBD的遗传易感区域位于第16号染色体后，其他的易感区域相继被报导，按报导的先后顺序位于染色体16、12、6、14、5、19和1的区域被命名为IBD1-7，此外还有染色体3、4、7、10及X亦有IBD的易感区域。此后一系列的精细微卫星扫描进一步定位并选取候选基因进行测序等确定单核苷酸多态性(SNP)位点进行连锁分析或关联分析证实了IBD的多个易感基因。 研究比较广泛的IBD的易感基因有NOD2/CARD15、DLG5、OCTN1,2等，其中位于IBD1区域的NOD2/CARD15是最早被发现的IBD的易感基因。NOD2(nucleotideoligomerisationdomain)，最近又被命名为CARD15(caspaseactivatingrecruitmentdomain15)，主要与CD相关，编码的NOD2蛋白具有结合、识别细菌脂多糖、激活NF-κB功能，其3个主要变异体(CARD152104C→T，CARD152722G→C，CARD153020insC)均可导致细菌成分识别功能异常或NF-κB不恰当激活而使患者易患CD。其与CD的正相关已经被西方国家多个研究中心证实，但是在日本、韩国、香港以及中国大陆多个研究均未发现其与CD相关，甚至多个研究并未发现这三个位点的多态性。DLG5、OCTN1,2是同一年被报导的与IBD相关的基因，后者在西方国家得到更多的一致性的结果。OCTN在药物和代谢产物的吸收、重新分部及清除中起重要作用，同时其还能转运肉毒碱，对维持机体内环境的稳定和细胞的正常能量代谢有重要的作用。多个研究表明OCTN1基因的1672C→T变异和OCTN2基因的-207G→C变异与西方白种人的IBD(特别CD)的发病有关，但日本人的研究却没有发现这两个位点的多态性。在本研究的第一部分将会检测OCTN基因(0CTN11672C/T，OCTN2-207G/C)及NOD2基因(CARD152104C/T，2722G/C)的遗传多态性在我国IBD患者中的分布及其与IBD的相关性。 最近多个西方国家运用高密度SNP芯片对IBD患者进行全基因组扫描除了发现既往报导过的NOD2/CARD15和OCTN1，2之外，还发现了IL23R，ATG16L1和5p13.1区域与CD相关，其中IL23R与CD的相关性更被多次证实。IL-23R的发现是人们认识CD发病机制道路上的又一里程碑，IL-23因子在依赖Th1通路的自身免疫性疾病(包括克罗恩病)的发病以及进展中起重要作用。IL23与IL23R结合后诱导记忆性CD4+T细胞(Th1)分化为IL-17分泌性辅助性T细胞(ThIL-17)，并促进多种炎症介质的释放，其作用范围具有器官和组织特异性。美国和加拿大两个研究中心分别证实了IL-23R与儿童和青少年的CD相关。但是日本人的大样本研究发现IL23R、ATG16L1和5p13.1这三个基因的多态性与日本人群的CD无关。在本研究的第二部分将会检测IL-23R的rs11209026A/G和rs1145816C/T在中国南方IBD人群中的分布以及其与IBD的关系，在得出阴性结果后我们在第三部分里再对IL-23R的11个外显子以及侧翼区进行测序以期发现新的与我国IBD相关的SNP位点。 综上所述，遗传因素在IBD发病中起重要作用，遗传易感性的研究进一步揭示IBD的发病机制，为将来的生物制剂药物的制备甚至是基因治疗开发更好的前景和提供更多的理论依据。由于东西方国家的遗传背景有显著的差异，在西方国家广泛被证实的IBD的易感基因在亚洲国家均无法得到一致的结果，我们需要寻找我们自己独特的IBD易感基因或者多态性位点。 第一部分中国炎症性肠病患者OCTN及CARD15基因的多态性研究 目的：虽然CARD15和OCTN基因与IBD的正相关性在多个西方国家得到证实，但是CARD15在日本、韩国、香港以及我国较小样本的研究中并未能证明相关性，日本人对OCTN基因的研究亦未发现其多态性，本研究旨在检测OCTN基因(OCTN11672C/T，OCTN2-207G/C)及NOD2/CARD15基因(CARD152104C/T，CARD152722G/C)的遗传多态性在我国IBD人群中的分布及其与IBD的相关性。 方法：建立IBD专科门诊，对门诊就诊和住院部收治的IBD患者前瞻性地记录人口学资料及各项临床参数，并留取外周血标本。选取61例CD患者、151例UC患者和200例性别、年龄及地域相匹配的健康对照，抽提外周血DNA，采用序列特异引物聚合酶链反应、限制性片段长度多态性技术对OCTN基因及CARD15基因上述四个位点的多态性进行检测。数据统计使用SPSS软件进行χ2检验。 结果：OCTN11672C/T，OCTN2-207G/C，CARD152104C/T和CARD152722G/C在我国IBD和健康人群中均为野生型纯合子，并未发现上述位点的多态性，提示与我国IBD的发病无关。 结论：本研究同西方国家的结果相反，与亚洲地区的研究结果一致，提示OCTN基因和CARD15基因的上述位点与我国人群的IBD发病无关。在国内第一个报道了OCTN11672C→T和OCTN2-207G→C的变异与我国IBD的关系，亦是亚洲第一个有关OCTN和UC之间的关系的报道。所采用的病例数较以往国内的同类研究有较大的增加。 第二部分中国南方克罗恩病患者IL-23R基因的多态性研究(上) 目的：最近一个高密度SNP芯片全基因组扫描结果提示白细胞介素23受体(IL-23R)内有10个SNP位点与CD相关，其中rs11209026，c.1142G>A，p.Arg381G1n位点统计学差异最为明显。本研究旨在检测Arg381G1n以及相邻近的另一个常见突变rs11465816(C/T)在我国南方CD患者的分布以及其与CD的相关性。 方法：建立IBD专科门诊，对门诊就诊和住院部收治的IBD患者前瞻性的记录人口学资料及各项临床参数，并留取外周血标本。选取71例CD患者和211例性别、年龄及地域相匹配的健康对照，抽提外周血DNA，用PCR扩增包含有Arg381G1n和rs11465816位点的目标片段并进行测序的。数据统计使用SPSS软件进行χ2检验。 结果：IL-23R的Arg381G1n以及rs11465816位点在我国南方CD患者和健康对照中均为野生型纯合子G/G和C/C，并未检测到这两个基因的多态性，提示与我国南方CD的发病无关。 结论：本研究表明IL23R上的Arg381G1n和rs11465816的多态性与中国南方人群的CD发病无关，与多个西方国家的研究不同，但是最近日本人发表的研究结果与本研究一致。 第三部分中国南方克罗恩病患者IL-23R基因的多态性研究(下) 目的：研究白细胞介素23受体(IL23R)所有外显子及外显子侧翼区(Flankingregion)单核苷酸多态性(SNP)与我国南方汉族克罗恩病(CD)的关系。 方法：建立IBD专科门诊，对门诊就诊和住院部收治的IBD患者前瞻性的记录人口学资料及各项临床参数，并留取外周血标本。选取病变局限于回肠末段的CD病人50例及性别、年龄及地域相匹配的健康对照50例，提取外周血DNA，对两组样本所有11对外显子及外显子侧翼区的基因序列进行聚合酶链式反应(PCR)扩增后直接测序，比较获得的SNP在两组之间的差别，并对有意义的易感性位点扩大样本量(134例CD，131例健康对照)进行研究。数据统计使用SPSS软件采用Logistic回归和χ2检验统计基因型频率间差别。 结果：测序区段包含34个SNP，其中4号外显子上游内含子区的“rs11465788”(C→T)与CD呈负相关，T携带基因型(TT+CT)对CD有保护作用(P=4.9×10-4，OR=0.30，95％CI=0.15-0.60)：进一步研究发现T携带基因型与“非狭窄非穿透型”CD相关(P=0.015，OR=3.9，95％CI=1.3-11.5)：我们在4号外显子的编码区发现一个新的非同义变异位点“Gly149Arg”，但未发现其与CD有相关性。 结论：本研究表明IL23Rrs11465788C→T的T携带基因型(TT+CT)与中国南方汉族CD负相关，对CD的发病可能有保护作用；T携带基因型与非梗阻非穿透型CD呈正相关。