氟喹诺酮类药物具有抗菌谱广、抗菌活性强、体内分布广等优点,是当今临床医疗上最常用的抗菌药物之一。但随着氟喹诺酮药物的广泛应用,细菌对其产生耐药性的问题也日益凸显。药物作用靶位基因的改变、细菌膜通透性降低、主动外排泵高水平的表达和质粒介导的氟喹诺酮耐药是细菌对氟喹诺酮类药物产生耐药的主要机制。质粒介导的耐药基因qnr可以通过保护DNA回旋酶和拓扑异构酶Ⅳ,使细菌对氟喹诺酮类药物产生耐药性,并且在相同的药物压力下更容易引发靶位基因的突变。同时,质粒还可以在细菌之间水平传播介导细菌的多重耐药。因此,本研究通过对广东地区携带PMQR基因动物源肠杆菌进行研究,旨在探讨其与靶位基因突变、外排泵机制、外膜通透性之间的协同作用。　　 1.动物源肠杆菌PMQR基因、QRDRs基因突变的检测及细菌耐药性的调查　　 本研究通过对本实验室保存PMQR疑似阳性菌,进行质粒介导喹诺酮类耐药PMQR基因(qnrA、qnrB、qnrS、qnrC、qnrD、aac(6)-Ib-cr、qepA)检测,成功的检测到了2株qnrD,4株qnrB,6株aac(6)-Ib-cr,17株qnrS,未检测到qnrC,qepA基因。研究结果显示,在广东地区兽医临床肠杆菌中PMQR基因的流行以qnrS为主,其次是aac(6)-Ib-cr,qnrA、qnrB、qnrD比较少。6株aac(6)-Ib-cr基因都是与qnr基因并存在细菌中。qnrB+qnrS、qnrS+qnrD、qnrB+qnrD分别各检出一株。但本研究未曾发现qnrA与其它PMQR基因共同存在。　　 通过对动物源肠杆菌PMQR阳性株进行氟喹诺酮类药物作用靶位酶GyrA、GyrB、ParC和ParE喹诺酮类耐药决定区(quinolone resistance-determining regions,QRDRs)突变检测,结果显示7株(33.3％)gyrA亚基突变株;其中有3株(14.29％)为S83I单一突变,对第三代喹诺酮类药物呈低度耐药;4株(19.05％)为S83L+D87N双突变,且细菌呈较高的耐药水平;有2株(9.53％)在parC亚基的58位上发生突变,呈中度耐药水平。所有受试菌株中未发现2个以上倍点的突变,且突变率不高。　　 动物源肠杆菌PMQR阳性株对20种药物的耐药情况十分严重,其中耐药性最严重的是头孢噻呋、磺胺甲噁唑、四环素、多西环素和利福平,耐药率分别为100％、100％、95.2％、90.5％和90.5％;头孢曲松目前虽然没有被批准在兽医临床上使用,但也出现耐药现象,耐药率为14.3％。不同的PMQR阳性菌株对氟喹诺酮类药物呈不同程度的耐药,同一菌株对实验所用的第三代氟喹诺酮类的耐药情况基本一致,存在着严重的交叉耐药性,从而减少了兽医临床用药选择。另外,所有菌株均呈现严重的多重耐药性,大于10耐,最为严重是20耐,即对所试药物均产生耐药(GDJ1)。　　 2.动物源肠杆菌外膜通透性与环丙沙星浓度蓄积的研究　　 本研究对21株动物源肠杆菌PMQR阳性株用超速离心的方法提取外膜成分后,经SDS-PAGE检测后发现,有5株缺失ompC蛋白;有14株缺失ompF蛋白,其中有12株(85.7％)为氟喹诺酮类耐药株。氟喹诺酮类药物耐药程度相同的菌株,呈现不同的外膜表型。其次,所有携带两个或两个以上的PMQR基因菌株及QRDRs发生突变的菌株,均发生了外膜蛋白(ompC、ompF)的缺失。　　 通过对PMQR阳性株菌体内环丙沙星蓄积量进行研究,发现受试菌均对盐酸环丙沙星的蓄积呈能量依赖性降低,其中以耐药株体内的药物浓度降低最为明显。加入能量抑制剂后,耐药株体内的药物浓度上升程度明显高于敏感株,但均达不到标准株体内药物浓度水平。盐酸环丙沙星在PMQR阳性受试菌体内的药物浓度呈时间依赖性增加。　　 3.动物源肠杆菌耐药相关基因表达及基因分型的研究　　 受试PMQR阳性菌中marA和marR表达的水平大部分低于标准株ATCC25922,且marA表达水平还低于阴性对照株;acrA表达水平低于标准株,大部分耐药菌株acrB表达水平高于标准株;ompF和ompC表达水平要低于标准株和阴性对照株,差异显著(P＜0.05)。acrAB两个外排泵基因的mRNA水平都没有发生变化。　　 通过对广东地区动物源肠杆菌的PFGE分析,发现PMQR菌株表现为多样不同的图谱,具有不同进化背景或来源。具有相同进化图谱的菌株,具有不同的耐药表型;而无进化关系的菌株,却存在相同的耐药表型。同时,广东地区同种动物养殖场之间存在着小范围的克隆垂直传播,不同菌株之间还存在着耐药质粒的水平传播。