RNF168对食管癌细胞迁移侵袭的影响

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背景食管癌是世界上第八大常见的恶性肿瘤,是具有“中国特色”的重大疾病,全世界每年新发生的40余万食管癌患者,其中一半以上发生在中国[1-2]。吸烟、饮酒、食管的慢性刺激等生活方式和环境因素的差异已经被确认可以增加食管癌的患病风险[3-4]。尽管食管癌的诊断和治疗近年来取得了较大进展,但其发病率和死亡率无明显下降。RNF168(RING finger protein 168)是DNA双链损伤修复通路中一个重要的泛素连接酶,在一些肿瘤中已经发现与RNF168有关,为寻找治疗食管癌新药物靶点,明确RNF168对食管癌的影响有重要意义。目的探讨RNF168对食管癌细胞的影响,从而为以后食管癌治疗的新药物靶点提供思路和方法。方法1.查询TCGA数据库,明确RNF168在人食管癌组织中的表达。2.用qRT-PCR和Western blot实验检测RNF168在食管癌细胞系中的沉默效果。3.运用WST-1细胞增殖实验明确RNF168对食管癌细胞系增殖能力的影响。4.结合划痕和Transwell实验观察RNF168对食管癌细胞系迁移、侵袭能力的影响。5.运用转录组测序寻找RNF168调控食管癌的靶基因。6.核浆分离实验及免疫荧光共定位实验检测RNF168与STAT1(signal transducers and activators of transcription 1,STAT1)在细胞内的共定位情况。7.用Western blot检测沉默RNF168后STAT1蛋白表达水平的变化,qRT-PCR明确RNF168对STAT1靶基因的影响。结果1.通过查询TGCA数据库,我们发现RNF168的mRNA水平在人食管癌组织中显著高于正常组织。2.qRT-PCR和Western blot实验结果证明了在食管癌细胞系中沉默RNF168后其mRNA和蛋白水平均明显降低。3.WST-1细胞增殖实验结果表明沉默RNF168后食管癌细胞的增殖能力明显减弱。4.划痕和Transwell迁移实验结果表明沉默RNF168的食管癌细胞迁移能力显著降低;Transwell侵袭实验中沉默组细胞穿过Matrigel胶的能力显著降低。5.通过转录组测序,我们发现沉默RNF168后JAK-STAT1信号通路发生改变。6.核浆分离及免疫荧光共定位实验结果显示RNF168与STAT1均在细胞核内。7.Western blot实验结果表明沉默RNF168后STAT1蛋白表达水平明显下降;qRT-PCR结果显示在沉默RNF168情况下,STAT1多个靶基因mRNA水平明显下调。结论RNF168影响JAK-STAT1信号通路,并且可以促进食管癌细胞的迁移侵袭等发展进程,从而为以后食管癌药物的靶向治疗提供新的思路与方法。
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