新藤黄酸诱导多发性骨髓瘤凋亡的实验研究

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研究目的:本课题通过体外实验探讨新藤黄酸(Gambogenic acid, GNA)诱导多发性骨髓瘤MM.1S细胞株凋亡的作用及机制,旨在为筛选治疗多发性骨髓瘤的药物和制定有效的化疗方案提供实验依据。研究方法:1.体外培养多发性骨髓瘤MM.1S细胞株,用不同浓度的GNA处理后,显微镜下观察细胞的形态;2.应用细胞增殖抑制实验(CCK-8法)研究24h、48h、72h不同浓度的GNA对MM.1S细胞的生长抑制情况;3.应用流式细胞术(Flow cytometry, FCM)检测高低浓度的GNA对MM.1S细胞周期与凋亡的影响;4.应用蛋白质印迹法(Western blot)定量检测高低浓度的GNA处理后Clv-PARP、P53、Clv-Caspase-3、Bax及Bcl-2凋亡相关蛋白的表达。实验结果:1.经不同浓度的GNA作用后,部分MM.1S细胞体积较正常细胞有所缩小,有的细胞外形不规整。2.用不同浓度的GNA分别处理MM.1S细胞株24h、48h及72h后,发现GNA对MM.1S细胞的抑制作用呈现出时间和浓度依赖性。GNA对MM.1S作用24h、48h及72h的IC50值分别约为1.299μM、0.883μM和0.752pM。3.GNA是将MM.1S细胞阻滞于G2/M期发挥作用的。与对照组相比,GNA组明显增加了MM.1S细胞的凋亡率。4.在GNA的作用下,MM.1S细胞Clv-PARP、P53、Clv-Caspase-3、Bax的表达显著升高,Bcl-2的表达显著降低。结论:GNA对多发性骨髓瘤MM.1S细胞有明显的抑制生长、阻滞细胞周期及诱导凋亡的作用;GNA抗多发性骨髓瘤的作用是通过调节PARP、P53、Caspase-3、Bax及Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达来实现的。
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