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人体摄入大量高脂饮食时常伴随脂肪酸代谢异常,可造成肝细胞脂质沉积并进一步诱导氧化应激发生。非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种与肝脏脂质沉积和氧化应激密切相关的代谢疾病。油酰乙醇酰胺(Oleoylethanolamide,OEA)作为一种内源性生物脂质信号分子,具有多种生理功能。但其调节脂质代谢和氧化应激进而调控NAFLD的作用机制尚未完全阐明。本研究以人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞L02为研究对象,从OEA可能参与调控细胞脂质代谢并调节氧化应激水平两个方面出发,探究OEA改善NAFLD的可能性,从而为NAFLD的预防和治疗提供一些科学依据与理论参考。首先,油酸棕榈酸混合物(2:1)诱导细胞建立脂质沉积模型。将不同浓度(0.2-1.2mM)的脂肪酸与HepG2和L02细胞处理24 h,结果发现:0.2 mM和0.4 mM脂肪酸对两种细胞活性无明显抑制作用,当脂肪酸浓度增加到0.6 mM,L02细胞的活性下降至空白组的69.33%,差异极显著(p<0.01);随着脂肪酸浓度的增加,HepG2和L02细胞内红色脂滴数量明显增多,甘油三酯(Triglyceride,TG)等中性脂肪含量也显著上升;当脂肪酸浓度为0.4 mM时,两种细胞内均存在大量红色脂滴,且细胞内TG含量相比于空白组显著上升(p<0.01),模型建立成功。其次,研究了OEA对HepG2和L02细胞脂质沉积的影响。将0.4 mM脂肪酸与不同浓度(0.1-100μM)OEA共同处理24 h,结果发现:0.1-25μM OEA对两种细胞无明显毒性作用;OEA降低HepG2和L02细胞内TG含量,且呈剂量相关性;进一步探究其作用机制,发现OEA能从转录和翻译水平上调脂肪酸氧化调控因子:过氧化物酶体增殖剂激活受体(Peroxisome proliferators-activated receptor alpha,PPAR-α)和肉毒碱棕榈酰转移酶1(Carnitine palmitoyltransferase 1,CPT-1)的表达,同时抑制脂肪生成关键因子:固醇调节元件结合蛋白-1c(Sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)和脂肪酸合酶(Fatty acid synthase,FAS)的表达。此外,研究了OEA对HepG2和L02细胞氧化应激水平的影响。将0.4 mM脂肪酸与不同浓度(0.1-25μM)OEA共同处理24 h,结果表明:OEA能够抑制脂肪酸引起的活性氧(Reactive oxygene species,ROS)生成增加,并降低脂质过氧化产物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量;此外,OEA显著增强了超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GPx)的活性并提高了细胞线粒体膜电位;进一步研究发现OEA对两种细胞内氧化应激的调节作用可能是通过增强抗氧化因子Nrf2和HO-1的途径实现。最后,检测了OEA对总调控因子AMPK表达的影响,并通过AMPK抑制剂Compound C验证AMPK是否调控细胞脂质代谢和氧化应激。结果表明:OEA能显著增强AMPK磷酸化而对总AMPK无影响;Compound C通过抑制AMPK的表达,减少其磷酸化,阻断了OEA诱导的SREBP-1c磷酸化,未磷酸化的SPEBP-1c进入细胞核,调控FAS大量表达;此外,Compound C通过阻断AMPK磷酸化,逆转OEA引起的核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和血红素加氧酶1(Heme oxygenase 1,HO-1)上调。综上所述,OEA可能通过激活PPAR-α并抑制SREBP-1c通路减少细胞脂肪沉积,并通过激活Nrf2/HO-1途径改善细胞氧化应激。OEA介导细胞脂质代谢和氧化应激可能部分通过AMPK磷酸化来实现。这些数据为OEA可能是NAFLD的有效治疗策略提供了一些科学支持。