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背景子宫内膜异位症(EMs)引起的疼痛、不孕及术后高复发率,严重影响患者的生活质量,但发病机制不明。本项目前期研究证实在位与异位子宫内膜干细胞(Endometrial stem cells,EnSCs)功能和基因表达差异显著,因此我们推测:在位EnSCs功能异常是EMs发生的先决条件,其导致在位子宫内膜活性异常,并通过经血逆流种植于子宫以外的位置形成异位病灶。本课题拟通过常规生物学方法检测在位与异位EnSCs的生物学特性及功能差异。其不仅能完善EMs的发生机制中的“干细胞学说”,而且为开发潜在的EMs诊断和治疗靶点提供理论基础。目的1.建立在位与异位EnSCs分离培养及鉴定方法。2.明确EMs患者与对照组人群在位EnSCs生物学活性和功能差异。方法1.临床收集内异症患者异位病灶内膜组织和对照组在位内膜组织样本,机械剪碎后Ⅰ型胶原酶消化,分离获得EnSCs,常规培养传代至第三代(Passage 3,P3)代备用。2.MTT法检测细胞增殖活性,成脂成骨诱导检测细胞多向分化潜能,流式细胞术检测细胞免疫表型。3.通过常规生物学方法检测对照组在位EnSCs、EMs患者异位EnSCs在迁移、粘附及促血管再生等能力上的差异。4.蛋白芯片检测EnSCs条件培养基中促血管再生因子及相关炎症因子的分泌,同时检测相关粘附因子在细胞表面的表达。5.取P3代EnSCs进行RNA-sequence高通量测序,初步筛选对照组在位EnSCs和EMs患者异位EnSCs的差异表达基因。结果1.成功从内异症患者异位病灶内膜组织和对照组在位内膜组织中分离获得EnSCs,所分离细胞阳性表达骨架蛋白Vimentin,且细胞阳性表达间充质干细胞表面标志物CD29、CD73、CD90及CD105,阴性表达造血干细胞表面标志物CD34和CD45。经成脂诱导分化后油红O染色可见明显脂滴,成骨诱导分化后茜素红染染色可见明显钙结节。2.异位EnSCs较在位EnSCs具有更强的增殖、迁移、粘附及促血管再生能力。3.蛋白芯片检测结果表明异位EnSCs能够分泌高浓度的促血管再生因子VEGF、ANG及PDGF-AA,以及与促血管再生密切相关的炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1,且细胞表面均高表达ACLAM和ICAM-1分子。4.通过高通量测序分析发现,在两组EnSCs中差异表达的基因共有523个,与对照组在位EnSCs相比,EMs患者异位EnSCs表达量上调基因有244个,表达量下调基因有279个。结论1.成功分离获得对照组在位及EMs患者异位EnSCs,对其生物学活性进行检测发现其符合间充质干细胞鉴定标准。2.对照组在位EnSCs和EMs患者异位EnSCs的生物学特性和功能具有显著差异。