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目的:采用环磷酰胺(CTX)创建化疗小鼠免疫抑制模型,观察针灸对小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响,检测针灸后小鼠血清中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量和脾脏组织中酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,从免疫抑制角度,初步探讨针灸修复CTX小鼠免疫功能损伤的作用机理,阐释针灸改善化疗所致小鼠免疫抑制的分子生物学机制。 方法:首先根据治疗天数的不同分为3d组和5d组,每组40只,分批次购买SPF级雄性昆明种小鼠(7周龄、体重22±2g),适应性喂养3天后称重,依据其体重将两组分别分层随机分成空白组、模型组、针疗组、灸疗组,每亚组10只,并将各组小鼠染色、编号。空白组连续3天依据小鼠体重按照0.02ml/g的剂量在腹腔注射9%生理盐水;其余3组连续3天均依据小鼠体重按照100mg/kg/d的剂量在腹腔注射CTX溶液,药物注射结束后4小时则造模成功。治疗时每日定时定人分别负责空白组、模型组小鼠的陪同固定,不做其他治疗;针疗组、灸疗组选取“大椎”、“膈俞”、“肾俞”、“足三里(后三里)”四穴分别进行针刺、艾灸治疗,按照所属组别的不同分别连续治疗3天和5天。各组小鼠分别在第3天、第5天治疗结束的次日摘除眼球取血,离心,取上清液,保存于-20℃冰箱中以备测定IL-6、TNF-α的含量,剖腹后迅速取出完整脾脏和胸腺,称其湿重并记录后保存于-80℃冰箱中以备测定ACP、LDH的活性。最后,整理所有实验数据,运用统计软件分析,得出结论。 结果:1.针灸干预3天后,与空白组相比,其余3组脾脏指数和胸腺指数均下降,且具有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,针疗组和灸疗组小鼠的脾脏指数和胸腺指数均升高,有统计学差异(P<0.05);与针疗组相比,灸疗组的脾脏指数和胸腺指数偏高,无统计学差异(P>0.05)。干预5天后,与空白组相比,其余3组的脾脏指数和胸腺指数均降低,有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,针疗组和灸疗组的脾脏指数和胸腺指数均上升,有统计学差异(P<0.05);与针疗组相比,灸疗组的脾脏指数和胸腺指数虽偏高,但无统计学差异(P>0.05)。 2.针灸干预3天后,与空白组相比,其余3组血清中IL-6含量表达均下降,且有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,针疗组和灸疗组中IL-6含量表达均升高,有统计学差异(P<0.05);与针疗组相比,灸疗组中IL-6含量表达偏高,无统计学差异(P>0.05)。经过5天干预,与空白组相比,其余3组血清中IL-6含量表达均降低,具有统计学差异(P<0.05);与模型组对比,针疗组和灸疗组中IL-6含量表达均上升,有统计学差异(P<0.05);与针疗组对比,灸疗组中IL-6含量的表达偏高,无统计学差异(P>0.05)。 3.针灸干预3天后,与空白组相比,其余3组血清中TNF-α含量表达均下降,且有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,针疗组和灸疗组中TNF-α含量表达均升高,有统计学差异(P<0.05);与针疗组相比,灸疗组中TNF-α含量表达偏高,无统计学差异(P>0.05)。经过5天干预,与空白组相比,模型组和针疗组血清中TNF-α含量表达均降低,具有统计学差异(P<0.05),灸疗组血清中TNF-α含量表达降低,但无统计学差异(P>0.05);与模型组对比,针疗组和灸疗组中TNF-α含量表达均上升,有统计学差异(P<0.05);与针疗组对比,灸疗组中TNF-α含量的表达偏高,无统计学差异(P>0.05)。 4.针灸干预3天后,与空白组相比,其余3组脾脏组织中ACP含量表达均下降,且有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,针疗组和灸疗组中ACP含量表达均升高,有统计学差异(P<0.05);与针疗组相比,灸疗组中ACP含量表达偏低,无统计学差异(P>0.05)。经过5天干预,与空白组相比,其余3组脾脏组织中ACP含量表达均降低,具有统计学差异(P<0.05);与模型组对比,针疗组和灸疗组中ACP含量表达均上升,有统计学差异(P<0.05);与针疗组对比,灸疗组中ACP含量的表达偏低,无统计学差异(P>0.05)。 5.针灸干预3天后,与空白组相比,其余3组脾脏组织中LDH含量表达均下降,有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,针疗组和灸疗组中LDH含量表达均升高,有统计学差异(P<0.05);与针疗组相比,灸疗组中LDH含量表达偏低,且有统计学差异(P<0.05)。干预5天后,与空白组相比,其余3组LDH含量表达均降低,有统计学差异(P<0.05);与模型组相比,针疗组和灸疗组中LDH含量表达均上升,有统计学差异(P<0.05);与针疗组相比,灸疗组中LDH含量表达偏低,且有统计学差异(P<0.05)。 结论:1.CTX经腹腔注射后会降低脾脏指数和胸腺指数,对小鼠脾脏和胸腺造成严重损伤;而针灸能够提升脾脏指数和胸腺指数,促进脾脏和胸腺的修复,缓解免疫抑制。 2.CTX会降低血清中IL-6和TNF-α的含量,针刺和艾灸可升高IL-6和TNF-α的含量,促进IL-6和TNF-α的表达,活化B细胞、T细胞发挥免疫效应,改善化疗引起的免疫抑制,提高机体的免疫力。 3.CTX会引起脾脏组织中ACP和LDH活性的下降,针刺和艾灸可提高ACP和LDH的活性,加快ACP和LDH的表达,促进吞噬细胞的激活,并修复和保护受损的脾脏,拮抗化疗引起的免疫抑制,增强机体的免疫功能。 4.针灸能够修复机体化疗后受损的免疫功能,改善免疫抑制。