丹参素与羟基红花黄素A合用对大鼠脑缺血再灌注损伤的协同作用及机制研究

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目的:脑缺血再灌注损伤涉及一系列错综复杂的损伤级联反应,因此,仅使用一种脑保护药物很难阻断损伤级联反应的发生,药物的联合应用可能会成为治疗缺血性脑血管病的新方向。本研究通过观察丹参素与羟基红花黄素A合用对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能学评分、脑梗死体积及脑组织病理形态学变化的影响,初步评价两药合用的协同保护作用。实验进一步观察两药合用对脑缺血再灌注损伤大鼠海马区神经细胞凋亡百分率及凋亡相关基因bcl-2、bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达的影响,深入研究两药合用对脑缺血产生协同保护作用的机制。 方法 取健康雄性Wistar大鼠200只,随机分为8组:假手术组,缺血再灌注损伤组(IR),丹参素组(24mg·kg-1),羟基红花黄素A组(20mg·kg-1),丹参素+羟基红花黄素A低剂量组(6mg·kg-1+5mg·kg-1),丹参素+羟基红花黄素A中剂量组(12mg·kg-1+10mg·kg-1),丹参素+羟基红花黄素A高剂量组(24mg·kg-1+20mg·kg-1)。采用改良的Zea Longa’s大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)制备可逆性大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,并于缺血1h后实现再灌注。各组分别于脑缺血时和再灌注时静脉注射1/2相应药物剂量。脑缺血1h再灌注24h后,每组取其中8只动物行神经病学检查,继而断头取脑经TTC染色后测定缺血侧脑组织梗死体积,将脑片固定于4%多聚甲醛磷酸缓冲液内,24~48h后行HE染色;6只动物利用流式细胞术测定细胞凋亡百分率;5只动物取大鼠海马组织利用RT-PCR技术分析药物对bcl-2、bax和Caspase-3 mRNA表达的影响;6只动物灌流固定后利用免疫组化方法分析药物对大鼠海马CA1区bcl-2、bax和Caspase-3蛋白表达的影响。
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