论文部分内容阅读
目的 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶是合成O-糖链的起始酶,而目前的研究认为,O-糖基化与分子及细胞识别、肿瘤的发生发展和转移以及胚胎发育等功能密切相关。鉴于国内对O-糖基化功能的研究尚在起步阶段,本文旨在获得稳定表达的pp-GalNAc-T2基因克隆以供进一步研究,并在mRNA水平观察pp-GalNAc-T2在不同人体组织中的分布,为以后的研究提供思路,方法采用Gateway克隆技术,以人脑cDNA库为模板克隆出pp-GalNAc-T2的可溶性部分;采用RT-PCR测定六种不同人体组织中pp-GalNAc-T2的表达,结果 1、利用人工合成的一对引物,以Marathon-ReadyTM人脑cDNA库为模板,成功地扩增到1条pp-GalNAc-T2 cDNA片段,经pDONRTM201克隆载体克隆扩增后抽提质粒并转入原核表达质粒pFASTBAC中,两个重组质粒均经线性化长度鉴定,或加以克隆PCR及测序鉴定后转染DH5α工程菌,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物的分子量与文献报道基本相符。2、六种不同人体组织中,以胃肠道组织中pp-GalNAc-T2 mRNA表达水平较高,脑和心肌中等,而肾脏和肝表达较低。结论本研究成功地获得pp-GalNAc-T2的原核重组克隆和表达质粒,为进一步研究打下基础;pp-GalNAc-T2在不同组织中表达的高低有较大差异,提示了它与组织功能的相关性,值得进一步研究。