抗乙肝病毒鸡卵黄免疫球蛋白的分离、提纯

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近年来,人们已越来越认识到卵黄是抗体生产的一种重要来源,并且鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)在作为免疫检测试剂、生化检测试剂及口服防治疾病的抗体方面,具有许多哺乳动物产生的抗体所无法比拟的优点。因此,目前已经成功的建立了多种IgY分离纯化的方法。但是,IgY还仍然未作为理想试剂和药物得到广泛应用,主要原因在于从卵黄中分离纯化IgY工艺复杂、耗时,且费用较高,不适于大规模生产。本论文首次采用乙肝疫苗作为免疫原免疫产蛋鸡,获得了抗乙肝病毒IgY抗体,所提取的抗乙肝病毒IgY经ELISA测定显示出较强的与抗原结合的活性。并且摸索出一条简便可行的分离纯化IgY的方法。经过研究发现:将卵黄液用pH=5的盐酸水溶液稀释10倍,静置6小时后离心分离,取上清液,然后分别用饱和度为55%和33%的(NH42SO4进行盐析,粗提后的组分经SephadexG150凝胶柱层析。使用含有0.14 mol/L NaCl的pH=7.0,0.02mol/L的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液作为洗脱剂,流速为10ml/h,上样量为1.0ml,上样浓度为0.3g/ml,分部收集,取第一个峰。经分光光度和SDS-PAGE测定,制得的IgY样品,产量为10.2mg/ml卵黄,纯度大于95%。采用质谱手段测定了抗-HBV IgY的平均相对分子质量为166975Da。由此可见,我们研究的水稀释—两步盐析—凝胶过滤法分离提纯的IgY产量大、纯度高,工艺简单,经济有效,为进一步的工业化奠定了基础。
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