【摘 要】
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目的:子宫内膜容受性是胚胎植入能否成功的关键,因此,子宫内膜容受性缺陷是导致胚胎植入失败的原因。mi RNA通过转录后修饰对子宫内膜容受性和胚胎着床起着重要的表观遗传调节作用。已发现mi R-23b在反复种植失败患者的分泌期子宫内膜显著上调,考虑其可能影响子宫内膜容受性的建立与维持和胚胎着床。本研究通过体外细胞实验进一步验证,探究mi R-23b对子宫内膜上皮细胞增殖、迁移和侵袭的影响,检测其对上
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目的:子宫内膜容受性是胚胎植入能否成功的关键,因此,子宫内膜容受性缺陷是导致胚胎植入失败的原因。mi RNA通过转录后修饰对子宫内膜容受性和胚胎着床起着重要的表观遗传调节作用。已发现mi R-23b在反复种植失败患者的分泌期子宫内膜显著上调,考虑其可能影响子宫内膜容受性的建立与维持和胚胎着床。本研究通过体外细胞实验进一步验证,探究mi R-23b对子宫内膜上皮细胞增殖、迁移和侵袭的影响,检测其对上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白的调控,通过构建滋养细胞球球体体外着床模型,研究mi R-23b对子宫内膜上皮细胞胚胎粘附能力的影响,以此证实mi R-23b对子宫内膜容受性和胚胎着床的影响。方法:1.常规培养子宫内膜癌细胞株Ishikawa,分别转染模拟物（mimic）及阴性对照（mimic nc）。实验分为3组:未转染组、mimic nc组、mimic组,实时荧光定量PCR方法检测转染后各组mi R-23b的表达水平,建立mi R-23b过表达模型。2.CCK8检测mi R-23b对子宫内膜上皮细胞增殖能力的影响。3.划痕实验检测mi R-23b对子宫内膜上皮细胞迁移能力的影响4.Transwell实验检测mi R-23b对子宫内膜上皮细胞侵袭能力的影响5.利用子宫内膜上皮细胞-滋养细胞球的体外着床模型,分析mi R-23b表达水平的改变对胚胎粘附能力的影响。6.利用Western blot检测mi R-23b表达水平的改变对上皮-间充质转化相关蛋白表达水平的影响结果:1.q RT-PCR实验结果表明,未转染组的相对表达量为1,mimic nc组相对表达量为（1.0427±0.0260）,mimic组相对表达量为（9.5633±0.4008）。mimic组的mi R-23b表达水平明显高于未转染组和mimic nc组,差异有统计学意义（P＜0.01）。结果显示本研究成功构建mi R-23b过表达模型。2.CCK8实验结果证实,mimic组增殖能力较未转染组和mimic nc组降低,差异有统计学意义（P＜0.01）。过表达mi R-23b抑制子宫内膜上皮细胞增殖。3.划痕实验表明,未转染组的划痕愈合率为（0.275±0.0056）,mimic nc组的划痕愈合率为（0.271±0.0028）,mimic组的划痕愈合率为（0.082±0.0029）。与未转染组和mimic nc组相比,mimic组的划痕愈合率明显降低,差异有统计学意义（P＜0.01）。过表达mi R-23b抑制子宫内膜上皮细胞迁移。4.Transwell实验表明,未转染组的侵袭细胞数为（52.8±4.237）,mimic nc组的侵袭细胞数为（51.9±3.985）,mimic组的侵袭细胞数为（31.7±4.473）。mimic组细胞侵袭数目明显小于未转染组和mimic nc组,差异有统计学意义（P＜0.01）。过表达mi R-23b能够抑制细胞侵袭。5.在子宫内膜上皮细胞和滋养细胞球的共培养体系中,未转染组的细胞粘附率为（0.811±0.046）,mimic nc组的细胞粘附率为（0.794±0.039）,mimic组的细胞粘附率为（0.372±0.126）。mimic组滋养细胞球的粘附率明显低于未转染组和mimic nc组,差异有统计学意义（P＜0.01）。过表达mi R-23b能够抑制胚胎粘附。6.Western blot实验显示,mimic组的E-cadherin蛋白表达明显高于未转染组和mimic NC组（P＜0.01）,mimic组的N-cadherin蛋白、Vimentin蛋白表达明显低于未转染组和mimic NC组,差异有统计学意义（P＜0.01）。过表达mi R-23b能够调节上皮间充质转化相关蛋白的表达。结论:过表达mi R-23b通过抑制子宫内膜上皮细胞的增殖、迁移和侵袭,影响子宫内膜上皮细胞功能,并抑制其转化以阻碍容受性的建立,阻碍胚胎着床。在子宫内膜容受性的建立和胚胎着床中扮演着重要的角色。
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