外源TDG调节小鼠卵母细胞减数分裂进程的研究

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在哺乳动物细胞中,5-甲基胞嘧啶(5-meC)可以通过甲基胞嘧啶双加氧酶TET蛋白(TET1,TET2和TET3)转化为5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)。胸腺嘧啶糖苷酶(TDG)是TET蛋白下游的酶,其功能不仅是在碱基切除修复上,而且作为一个关键的酶参与到DNA主动去甲基化的过程中。我们将外源的TDG-mCherry mRNA通过显微注射注入生发泡期(GV期)的小鼠卵母细胞中,发现 TDG-mCherry mRNA起先定位于细胞核中。生发泡破裂(GVBD)之前,TDG-mCherry被从细胞核中释放进入细胞质中。激活诱导胞嘧啶脱氨酶(AID)是另外一种与DNA主动去甲基化相关的酶。与TDG正相反,其在 GV期卵母细胞中位于细胞质,刚好在GVBD之前进入到细胞核中。但是TDG和AID都可以进入到注入到卵母细胞细胞质中的G0期卵丘细胞的细胞核中。为了分析TDG在卵母细胞成熟过程中的影响,我们在GV期卵母细胞中过表达TDG。结果发现GVBD率和极体排出率都显著的降低了。当TDG过表达的卵母细胞阻滞在GV期,卵母细胞染色质会解凝集,组蛋白H3K9三甲基(H3K9me3)和组蛋白H3K9二甲基(H3K9me2)的水平会降低。我们还发现TDG可以降低卵母细胞基因组DNA中5-甲基胞嘧啶的水平。所有的这些结果说明TDG异常的表达会引起小鼠卵母细胞的表观遗传修饰和减数分裂细胞周期的阻滞。
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