一、目的：从成年动物分离的神经元的成功培养相当困难,其中新皮层成年神经元的体外培养更加困难,因此用于研究神经生理的原代培养的神经元细胞一般限于胚胎或年轻神经元。然而,胚胎或年轻神经元并不是研究年龄相关生理机制与迟发性疾病的最佳细胞。最近的一些文献说明,成年神经元也能在体外培养成活。这里我们报道一个从成年鼠脑新皮层获得的神经元体能在外培养成功的方法。在获得单个神经元的过程中,神经元遭受机械、化学消化以及缺氧等损害,细胞出现代谢及功能障碍,细胞会出现水肿、破碎,神经元的粘附能力以及细胞活性也会下降。因此我们推测减轻水肿、促进细胞粘附会有效改善细胞体外培养。白蛋白具有减轻水肿与结合多种有机物质的能力。因此我们推测减轻细胞水肿、提高细胞粘附能力有助于神经元的体外生存。由于白蛋白具有以上两种功能,我们进而推测白蛋白具有改善神经元培养的能力。 方法：0.05％-1％牛血清白蛋白成分V用于神经元培养,研究不同浓度的白蛋白对神经元活力、粘附细胞数的影响。 结果：0.1-0.5％牛血清白蛋白能有效的促进细胞粘附、提高细胞活力。7天培养后,我们能获得90％纯度的成年皮层神经元。 结论：适当浓度的牛血清白蛋白成分V能有效的促进细胞粘附、提高细胞活力。 二、目的：氧糖剥夺试验(Oxygen and glucose deprivation,OGD)是体外研究缺血的公认模型,这一模型已广泛应用于研究心脑缺血机制。然而,经过数十年的改进,尽管实验方法越来越简单、易于操作,而且。但由于标准不一,在进行部分缺氧或者不同程度缺氧程度实验中,同样浓度的低氧环境,不同的实验者描述的缺氧时间常会不一致。由于氧浓度不同,对细胞的影响不同。低氧会刺激细胞生长,而缺氧会造成细胞损害。这些混乱让读者无法对试验结果进行精确的结果评价。因此,对缺氧程度、时间的精确描述有助于OGD试验结果的描述。考虑到体外缺氧试验进行时,细胞或组织利用的氧气实际是溶解在培养基中的溶解氧,因此我们以溶解氧分压高低作为缺氧程度的指标,并以到达缺氧标准时间点开始计算时间。 方法：在同一浓度氧与培养基数量一致环境下,检测不同数量培养细胞形成的溶解氧分压从正常氧分压下降到缺氧氧分压标准的时间曲线；在同一浓度氧与培养的细胞数量一致环境下,检测不同数量培养基形成溶解氧分压从正常氧分压下降到缺氧氧分压标准的时间曲线； 结果：在到达缺氧标准之前,细胞数多的溶解氧分压下降比细胞数少的快；培养基体积少的溶解氧分压比体积多的下降快。但最后都会下降亦较为恒定的平台期。 结论：缺氧的时间应该从测到溶液中氧分压达到缺氧标准开始计时。而缺氧前的时间为低氧刺激时间而不是缺氧时间。只有先进行“定量细胞-定量培养基-溶解氧分压-时间”预实验,找出达到预定缺氧分压得时间点,才能精确决定缺氧时间长短。 三、高血糖是预测缺血性或出血脑中风的住院病人发病和/或致死的一个独立因素。导致高血糖症的机制并不十分清楚,但研究显示异常糖异生是原因之一。传统的概念认为，脑不能进行糖异生。但近年来的研究表明：脑星型胶质细胞能利用乳酸,表达控制糖异生的关键酶。因此，推测脑中风时星型胶质细胞进行糖异生是导致高血糖症的原因之一。考虑到脑中风疾病不但导致血糖升高,还导致血中溶血磷脂酸(LPA,Lysophosphatidic Acid)升高值,且LPA是导致高血糖症病人胰岛素抵抗的原因之一。为进一步推测LPA会调节脑星型胶质细胞的糖异生,将培养的星型胶质细胞在糖剥脱的条件下处理,细胞分未加与不加LPA组。并对各组予以细胞信号阻断剂分别处理。结果显示：在剥夺糖的培养中：没有LPA细胞也能表达G6Pase,这一表达不会被Bis、Xes-C或Xes-C+Bis阻断,但会被PTX与Neomycin阻断；加入LPA情况与不加LPA完全一样。结果还显示：有糖培养时，无LPA时G6Pase并不表达,PTX、Neomycin以及Bis均不能刺激G9Pase的表达,但加入Xes-C或Xes-C+Bis时细胞会表达G6Pase;LPA可以刺激G6Pase的表达,而且该表达可以被Bis、Xes-C以及Bis+Xes-C阻断,但不被PTX或Neomycin所阻断。这些结果暗示：无糖时星型胶质细胞表达G6Pase,LPA不影响G6Pase的表达起作用；并且与PLC活化有关,但不与PLC活化的PKC与IP3相关。糖抑制星型胶质细胞表达G6Pase,并且通过激活PKC与IP3途径抑制G6Pase表达,而PKC活化与IP3活化似乎不是与PLC直接相关。