牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)是引起牛呼吸道综合征的重要病原,具有组织嗜性广的特点,除侵害呼吸系统外,还侵害生殖系统和神经系统,引起严重临床症状,给奶牛业健康发展造成重大影响。目前,在世界各地均有感染IBRV的相关报道,而国内牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)在奶牛中流行严重,但整体流行情况尚不明确。近年来,国内对IBR的检测主要依赖进口试剂盒,检测成本较高,有必要建立一种具有低成本、快速、准确、高通量的,适用于在牛群中开展IBR流行情况调查的检测方法。为此,本研究采用Meta分析方法进行系统评价和综合分析,评估中国大陆奶牛感染IBRV的整体流行情况以及影响其血清学易感性的风险因素,为制定因地制宜的防控措施提供理论依据;同时,采用IBRV gE重组蛋白作为包被原建立了与免疫标记疫苗相适应的gE-iELISA检测方法,非常适用于IBR的监测、筛查、流行病学调查、疫苗免疫和自然感染的鉴别诊断,为我国奶牛业未来的长足发展提供技术支撑。(1)从在中英文数据库中检索国内IBR流行相关的已见刊文献,时间截止于2018年12月31日,共计4357篇,经筛选评估后,提取符合要求的42篇文献标准化数据进行Meta分析。在不同出版物中,来自7个行政区中的45238头奶牛总阳性率为40%(95%CI:33-46),其中西北地区奶牛阳性率较高为43%(95%CI:32-54;2989/6243);各省份奶牛阳性率存在差异,阳性率在12%~66%之间;与LAT、PCR、VNT、IHA诊断方法相比(17%,95%CI:10-24;511/3160),ELISA方法应用普遍且检出率较高(45%,95%CI:39-52;17887/42078);犊牛、后备牛和成年牛阳性率分别为23%(95%CI:8-38;436/1268)、33%(95%CI:21-45;881/2063)和49%(95%CI:38-60;4463/9709);2013年至2018年阳性率高于2013年以前,分别为43%(95%CI:35-50;15487/35675)和34%(95%CI:24-43;2911/9563)。分析结果表明IBR在奶牛中阳性率呈上升趋势,且在中国区域内分布不均,进一步证实近年来我国奶牛群IBRV感染已变得越来越严重。IBR的阳性率与论文发表时间、检测方法、研究区域、发育阶段、临床症状(肺炎、流产等)有关,提示中国大陆奶牛群中普遍存在IBRV,必须监测奶牛群IBR的流行情况,并应采取有力和有效的监管措施,以防止疾病的蔓延。(2)采用基因合成的方法合成IBRV gE基因片段,与pET-32a载体连接,构建pET32a-gE重组质粒,转化至BL21感受态细胞中诱导表达,当IPTG浓度为1.0 mmol/L、诱导时间为4h、诱导温度为37℃时,诱导表达效果最佳,经SDS-PAGE方法验证,表达的gE重组蛋白大小约为43kDa,镍柱纯化后测得蛋白浓度为1.591mg/mL,通过Western blot方法验证gE重组蛋白能够与阳性血清发生反应,具有良好的反应原性,与预期结果一致。结果表明:gE重组蛋白成功表达,为诊断方法的建立、疫苗的研制和机制的研究奠定基础。(3)应用纯化的gE蛋白作为包被原,优化反应条件,建立牛传染性鼻气管炎间接ELISA(IBR gE-iELISA)检测方法,并确定阴阳性临界值。应用建立的gE-iELISA方法检测牛病毒性腹泻阳性血清、牛流行热阳性血清、牛副流感阳性血清、牛腺病毒阳性血清,计算S/P(%)值均小于37.9%,无交叉反应,特异性良好;IBRV阳性血清按1:1000稀释检测结果仍为阳性;批内、批间变异系数均小于10%;与IDEXX试剂盒相比,符合率为92.7%。本研究建立的IBR gE-iELISA方法,可用于奶牛场中IBR的流行病学调查。