【摘 要】
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严重急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)是由一种新型冠状病毒(SARS病毒)引起的急性呼吸系统疾病.本文通过现代分子生物学实验技术手段,建立了两种独特
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严重急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)是由一种新型冠状病毒(SARS病毒)引起的急性呼吸系统疾病.本文通过现代分子生物学实验技术手段,建立了两种独特的高效的SARS病毒RNA检测方法.竞争RT-Nested PCR方法,通过构建Internal Control RNA,使其同时具有阳性对照、内部对照、竞争性RNA的三重功能,弥补了至今普遍被应用的RT-Nested PCR方法检测SARS病毒RNA易于出现假阳性和假阴性的结果及不能对SARS病毒RNA进行定量分析的不足,大大降低了出现假阳性和假阴性的机率,同时能对SARS病毒RNA进行半定量分析.实时荧光定量one step RT-PCR方法,通过进行大量的反应体系及反应条件的探讨实验,建立了一种快速、准确、特异、灵敏的SARS病毒RNA定量检测体系.快速——时间仅需40多分钟,目前报道同类方法约需2个小时.准确——SARS病毒RNA检测用探针采用FAM标记,Internal Control RNA检测用探针采用ROX标记,结果无需电泳,在同一反应体系中两波段同时实时监控,最有效地控制假阳性、假阴性的结果.同时应用构建的SARS ControlRNA绘制的标准定量曲线,具有高度信赖的定量线性关系.特异——采用了Taq Man探针方法和Hot Start用DNA聚合酶Ex Taq HS可进行高灵敏度、高特异性地检测.灵敏——最低可检测到数拷贝的体外转录RNA分子.本研究结果表明,上述两种SARS病毒RNA检测方法都具有其独创性及优越性,具有广泛的临床应用价值,并且对基础理论研究具有重要的指导意义.
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