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目的:观察不同浓度重组高迁移率族蛋白1(recombinationhighmobilitygroupboxprotein1,rHMGB1)对DEN2感染鼠源单核巨噬细胞Ana-1产生TNF-α和NO的影响。 方法:直接免疫荧光及RT-PCR鉴定DEN2感染Ana-1细胞;Real-timePCR动态监测DEN2感染Ana-1细胞后胞内病毒增殖情况;DEN2感染Ana-1细胞后,与不同浓度重组HMGB1进行培养,Real-timePCR检测24h时间点感染组及不同浓度重组HMGB1组中病毒载量情况;以双抗体夹心ELISA方法检测各组上清液中TNF-α的分泌水平;以Griess试剂检测各组上清液中NO含量。 结果: 1.DEN2感染Ana-1后,直接免疫荧光检测到DEN2并且RT-PCR检测到病毒的目的基因NS5,条带大小为177bp,证实DEN2可以感染Ana-1细胞。 2.Real-timePCR动态监测DEN2感染Ana-1胞内病毒载量,在24h病毒载量达高峰,48h病毒载量水平显著下降,2-△△Ct值分别为50241.67±9570.96,71.67±23.67,差异具有显著性统计学意义(P<0.05)。DEN2NS5引物的熔解曲线波峰单一,峰形锐利。 3.Real-timePCR检测不同浓度重组HMGB1处理组的病毒载量,与DEN2组相比,D-HMGB1(即DEN2-HMGB1)处理组病毒载量明显下降,D-HMGB1-1组(HMGB1处理浓度为1ng/ml)﹑D-HMGB1-10组(HMGB1处理浓度为10ng/ml)﹑D-HMGB1-100组(HMGB1处理浓度为100ng/ml)和D-HMGB1-1000组(HMGB1处理浓度为1000ng/ml)抑制率(％)分别为41.53±2.12﹑55.30±1.59﹑74.75±1.12﹑86.35±1.42,差异有统计学意义(P<0.05)。随rHMGB1处理浓度增加,对胞内病毒增殖的抑制率增大。 4.双抗体夹心ELISA法检测TNF-α浓度,与DEN2组比较,D-HMGB1组TNF-α浓度有所下降,且rHMGB1浓度越大,TNF-α浓度下降越明显,差异有统计学意义(P<0.05)。 5.Griess试剂检测NO含量,rHMGB1作用后NO浓度明显减少,与DEN2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论: 1.在体外DEN2可以感染Ana-1细胞; 2.重组HMGB1对DEN2在Ana-1胞内的复制,有一定抑制作用。病毒抑制率与rHMGB1浓度成正相关; 3.重组HMGB1对DEN2感染Ana-1分泌TNF-α,NO有一定抑制作用,rHMGB1浓度越高,TNF-α和NO的分泌量越少。