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酵母β-1,3-D-葡聚糖能增强哺乳动物的免疫活力,主要包括抗癌、抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗辐射、抗感染、降低胆固醇和血脂、促进伤口愈合等,是一种良好的生物效应调节剂[BRMs]。本文以酵母自溶残渣为原料,采用一种新工艺来提取β-1,3-D-葡聚糖,并对其硫酸化衍生物进行了研究。主要研究内容和结果如下:
1、研究了酵母β-1,3-D-葡聚糖的提取工艺传统的碱法、酸-碱提取法得到的酵母β-1,3-D-葡聚糖杂质含量高、分子量小、得率低且对环境污染较严重。本文改进了传统的提取方法,采用酶-碱法提取酵母β-1,3-D-葡聚糖的新工艺,称取酵母自溶残渣10g分散于100ml水中,然后酶解。并通过单因素实验和正交实验,确定最佳的酶解条件为:alcalase 2.4L水解蛋白酶酶添加量1600IU/g底物、酶解时间3h、pH8.0、温度60℃;最佳碱处理工艺条件为:向酶解后经离心分离的沉淀物中添加60ml2.0%氢氧化钠在75℃温度下处理6h。
2、酵母β-1,3-D-葡聚糖的理化性质对酵母β-1,3-D-葡聚糖成品的溶解性、颜色反应等理化性质进行了研究,并利用红外光谱、紫外扫描、纸层析技术等对产物的结构及多糖组成进行了分析鉴定。比较分析了酸.碱法和酶.碱法提取的酵母β-1,3-D-葡聚糖的常规成分及分子量的大小,结果显示酶.碱法提取的酵母β-1,3-D-葡聚糖的得率、多糖含量和分子量高,而蛋白质含量低,比传统的酸.碱法提取具有明显的优越性。
3、酵母β-1,3-D-葡聚糖的硫酸化通过单因素实验和正交实验,确定了制备高取代度的酵母β-1,3-D-葡聚糖硫酸酯的最佳工艺条件为:0.3g酵母β-1,3-D-葡聚糖分散于10ml二甲基甲酰胺中,磁力搅拌使其充分悬浮,加入浓度为15%氯磺酸的酯化剂15ml,在60℃水浴下反应3h。制备出取代度高达0.88,在水中溶解度为423f/1000ml的酵母β-1,3-D-葡聚糖硫酸酯,且红外光谱表明,酵母β-1,3-D-葡聚糖分子中已经成功引入了硫酸基基团。