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环境雌激素(EES)是指一类进入动物机体后,具有干扰其体内正常内分泌物质的合成、释放、运输、结合、代谢等过程,激活或抑制内分泌系统的功能,从而破坏维持机体稳定性和调控作用的化合物,其对人类和野生动物的有害效应已引起了国际的广泛关注。卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)是卵生动物(如性成熟雌鱼)的特有蛋白,但是暴露在含有类雌激素物质水环境中的雄鱼及幼鱼体内也会被诱导产生VTG。因此,VTG蛋白或者mRNA可以作为监测环境雌激素的生物标志物。
本文以环境雌激素为研究对象,选取鲮鱼(Cirrhinusmolitorella)、罗非鱼(Tilapianilotica)和条纹密鲈(Colisafasciata)作为实验动物,利用卵黄蛋白原mRNA作为生物标志物结合原代细胞培养、实时定量PCR等技术,建立了体内和体外的环境雌激素检测模型。运用该模型对环境雌激素类物质,包括雌二醇(E2)、辛基酚(OP)、镉(Cd2+)和全氟辛烷磺酸类物质(PFOS)进行雌激素效应评价,同时对某些商品饲料和某野外水域的环境激素污染进行了初步地评估。
克隆了鲮鱼VTG基因cDNA全长序列与鲮鱼雌激素受体α、β,雄激素受体基因;条纹密鲈VTG和beta-肌动蛋白基因cDNA部分序列。分别获得长度4216、1652、2132、711、3464和1253bp的cDNA序列,编码长度分别为1342、550、609、237、1150和375的氨基酸序列。
利用活体与体外检测模型对OP、Cd2+和PFOS进行的研究表明,OP和Cd2+具有弱雌激素效应。但是,Cd2+活体和体外实验结果不一致,说明Cd2+引起雌激素效应的机理和雌二醇(E2)可能不一样。PFOS未见显著的雌激素效应。引入半效浓度EC50概念对OP的雌激素效应进行量化,结果显示OP的雌激素效应当量相对于E2的0.102~0.598%。
利用活体检测模型,对一些商品饲料的雌激素效应进行调查。结果显示,大多数受检饲料具有雌激素效应。利用活体检测模型对广东两处河流城市段的雌激素效应进行调查,结果显示,某江段已受到了环境雌激素污染,而另一受检江河则未见明显环境雌激素污染。