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研究背景:微小RNA(microRNA,miRNA)是一类大小为20~25个核苷酸(nucleotide, nt)的非编码小RNA。成熟的miRNA与其靶信使RNA(messenger RNA,mRNA)完全或不完全配对后,通过切割或抑制靶mRNA的转录后翻译,参与调节生物的发育、细胞的分化[1]、增殖[2]和凋亡[3]等。近年研究表明:miRNA与肿瘤的发生、发展关系密切,某些miRNA在胶质瘤中呈特异性表达。最近研究发现,miR-7在多种肿瘤是低表达[4-6],但有关miR-7在胶质瘤方面的研究很少。研究目的:1.研究miR-7对胶质瘤细胞增殖、周期、凋亡侵袭功能的影响,并对其机制进行初步探讨。2.初步探讨miR-7抑制人胶质瘤的侵袭能力的可能机制,为今后靶向治疗胶质瘤疾病提供新的靶点。研究方法:1.功能研究:选取人胶质瘤细胞系U87和U251细胞,培养于含10%新生牛血清的DMEM(Gibco公司)培养基,并置于37℃、5%CO2孵箱中,取对数生长期细胞实验。实验分为特异性miRNAs组,阴性对照组和空白对照组。委托上海吉玛公司合成特异性miRNAs寡聚核苷酸,转染U87和U251胶质瘤细胞。通过噻唑蓝(MTT)实验、细胞划痕试验、流式细胞仪(FCM)检测和Transwell实验,观察上调miR-7表达后对胶质瘤细胞增殖、周期、凋亡和侵袭能力的影响。2.机制研究:根据生物信息学数据库预测结果,筛选miR-7的候选靶基因,应用荧光素酶报告实验对候选靶基因进行验证。并用PCR和Western blot方法,检测过表达miR-7后相关基因及蛋白的表达变化,并在胶质瘤组织中验证miR-7与靶基因的相关性。研究结果:1.过表达miR-7抑制胶质瘤细胞增殖。2.过表达miR-7通过抑制CyclinD1阻滞胶质瘤细胞周期在G1期。3.过表达miR-7通过调控Bcl-2家族促进胶质瘤细胞凋亡。4.过表达miR-7下调MMP家族蛋白的表达从而抑制胶质瘤的侵袭。5. miR-7靶向作用FAK3′UTR。6.在胶质瘤组织中miR-7和FAK表达呈负相关。研究结论:1.过表达miR-7可以抑制细胞增殖、诱导凋亡,阻滞细胞周期在G1期,并抑制迁移和侵袭能力。miR-7在胶质瘤中可能发挥着肿瘤抑制因子作用。2.在胶质瘤细胞中, miR-7直接调控潜在的靶基因FAK的表达抑制MMP-2和MMP-9的表达。在胶质瘤组织中miR-7和FAK表达呈负相关。miR-7/FAK信号通路参与抑制胶质瘤细胞的侵袭。miR-7有望成为胶质瘤基因治疗的侯选靶点。