文冠果无性快繁技术研究

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本研究通过芽器官发生和体细胞胚胎发生两种途径,建立了文冠果的无性快繁再生体系;并通过分光光度计法,对组织培养中获得的胚性愈伤组织和不定芽小苗中的总皂苷成分进行了定量和定性分析。本论文的主要内容和结果如下:1以芽为外植体的植株再生(1)选取3个不同取材时间(5月10日、6月10日和7月10日)的文冠果芽外植体进行接种,5月份取材的顶芽萌发率和生长最好,7月份最差,几乎没有腋芽萌发。(2)5月份取材外植体在MS+6-BA0.1mg/L条件下,芽的萌发和生长较好,芽萌发率和高分别为88.4%和2.5cm。6月份取材的外植体在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L条件下,芽的萌发率较高,约51.3%,萌发芽高为1.5cm。(3)5月和6月份取材获得的芽继代容易死亡,在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L条件下,继代生长最好,其4周的存活率为24%。(4)获得的萌发芽不易生根,生根的最佳培养条件为1/2MS+IBA0.8mg/L+NAA0.4mg/L,生根率为24%。2通过体胚发生方式的植株再生(1)文冠果成熟合子胚为外植体,在1/2MS+2,4-D0.3mg/L条件下胚性愈伤组织的诱导情况最好,诱导率为100%,且生长量最大;在MS+2,4-D0.5mg/L条件下进行增殖和继代,愈伤组织的胚性维持良好,增殖率和生长量最优。(2)选取3个不同发育时期(初期、中期、后期)文冠果合子胚为外植体接种,发育初期和中期的合子胚更有利于体细胞胚的诱导发生,发育后期的合子胚更利于不定芽的诱导发生。(3)发育中期的合子胚在MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L条件下,体胚发生率最高,可达43%,体胚发生数为63;在体细胞胚的继代和增殖过程中,不断有新的体细胞胚生成,并在原体细胞胚上陆续产生了次生胚,诱导出的体细胞胚可以发育为成熟子叶胚,但也出现形态异常的畸形胚。成熟的体细胞胚在1/2MS和MS萌发培养基培养中,能够迅速萌发,萌发率可达100%。(4)发育后期的合子胚在MS+6-BA1.Omg/L+NAAO.5mg/L条件下,不定芽的诱导最好,诱导率为100%;生成的不定芽在MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L的条件下,暗培养,小苗的长势最好,出苗率整齐且生长平均高度最高,可达4cm;不定芽的生根率不高,在1/2MS+IBA0.8mg/L+NAA0.4mg/L,生根率为24%。3文冠果体细胞胚发生过程中的总皂苷含量初探选取文冠果成熟合子胚诱导产生的胚性愈伤组织、未成熟合子胚诱导产生的不定芽小苗和文冠果果壳三种材料,以人参皂苷Re为对照品,采用分光光度法,高氯酸显色,在540nm处测定吸光度。人参皂苷Re在0.08-0.28mg范围内线性关系良好(r=0.9995),平均回收率为96.97%,RSD为1.01%,该方法简便、准确、灵敏、重现性好。文冠果胚性愈伤组织的总皂苷含量最高,为0.9mg/g;不定芽小苗的总皂苷含量最低,为0.76mg/g;果壳的总皂苷含量为0.86mg/g。
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