背景:胰腺癌（Pancreatic cancer,PC）是一种恶性程度极高的实体肿瘤,预计到2030年将成为全球癌症死亡原因的第二位。手术切除是目前胰腺癌治疗的主要方法;然而,80-85%的患者确诊时已无法切除,且术后多数病人易发,致使其5年生存率低于10%。目前辅助化疗方案虽然对部分病人有效,但对于延长患者的生存时间的作用不明显,且毒副作用较大。精准治疗在乳腺癌和卵巢癌等其他类型的肿瘤中应用广泛,但针对胰腺导管腺癌（PDAC）的精准治疗药物较少,临床研究中厄洛替尼对PDAC患者的生存期的延长效果甚微。近年来,尽管发展了一些针对胰腺癌新的治疗策略,但取得的效果非常有限,其治疗仍是一个挑战性的问题。“协同致死”是一个新的治疗策略,它是基于DNA损伤修复通路的一个通路中关键基因的缺失,而针对性的抑制其补偿通路,造成肿瘤细胞的DNA损伤无法修复而进入有丝分裂期,通过有丝分裂灾难机制而导致细胞的死亡。基于“协同致死”原理和“BRCAness”效应探索新的治疗策略,将扩展“协同致死”治疗的应用范围。BEND4位于4p13,是BEN结构域家族成员之一。BEN结构域在发育过程中发挥重要作用。肺癌全基因组DNA硫化测序初步显示BEND4基因区域存在甲基化现象。我们分析发现BEND4基因的启动子区域存在CG岛,BEND4的表达调控和功能机制目前仍不清楚。JAM3位于11q25,是编码连接粘附分子家族的一个成员。研究发现JAM3在结直肠癌中可能是一种新的肿瘤抑制基因。但JAM3在胰腺癌中的表观调控机制尚不清楚。方法:本论文应用了 8个株胰腺癌细胞株、15例正常胰腺组织、111例胰腺癌前病变组织、204例原发性胰腺癌及64例癌旁组织。应用RT-PCR、MSP和BSSQ技术分析BEND4基因在胰腺癌细胞株中是否受甲基化调控,并分析了BEND4在胰腺癌组织中的甲基化情况。通过慢病毒感染、CRISPR/Cas9基因敲除、MTT、克隆形成、Transwell、流式细胞技术、westem blot、免疫共沉淀、裸鼠成瘤实验等技术对BEND4在胰腺癌细胞中的功能及作用机制进行了研究。通过药物敏感性实验、裸鼠成瘤实验等方法探讨BEND4耐药机制及其启动子区甲基化作为胰腺癌“协同致死”治疗标志物的可能性。此外,本论文还通过RT-PCR、MSP技术在胰腺癌细胞和组织中研究了 JAM3基因的表达是否受启动子区甲基化调控以及JAM3在胰腺组织中的甲基化与临床因素的关系。结果:1、通过对8胰腺癌细胞系的研究发现,BEND4基因的表达受启动子区甲基化的调控,BEND4 在 PANC3.11、PANC1、SW1990、MiaPaCa2、AsPC1、PANC5.04和PANC10.05细胞表达缺失,基因启动子区呈现完全甲基化状态;在CFPAC1细胞中表达水平降低,启动子区呈现部分甲基化状态。BEND4基因在正常胰腺组织中不发生甲基化（0/15）,在胰腺癌前病变组织中的甲基化率为8.11%（9/111）,在胰腺癌组织中的甲基化率为53.92%（110/204）,BEND4甲基化在胰腺癌的发生发展进程中呈累积性改变。BEND4甲基化与胰腺癌患者的年龄（P＜0.05）和肿瘤分化程度（P＜0.01）显着相关,而与性别、肿瘤大小、肿瘤位置、神经侵犯、临床分期、淋巴结转移、吸烟、饮酒等因素无关（P＞0.05）。BEND4能够抑制胰腺癌细胞增殖和迁移侵袭能力,并诱导细胞凋亡和G1/S期阻滞。体内实验发现BEND4抑制SW1990细胞的裸鼠体内成瘤的能力。进一步研究发现,BEND能与KU80相互作用激活DNA损伤修复的NHEJ通路。BEND4甲基化表达缺失对ATM抑制剂（AZD0156）敏感性增加。2、在胰腺癌细胞系中研究发现JAM3基因的表达受启动子区甲基化调控。JAM3基因在正常胰腺组织中不发生甲基化（0/5）,在胰腺癌组织中频繁发生甲基化,其甲基化率为48.1%（38/79）。在79例胰腺癌样本中JAM3的甲基化与胰腺癌分化程度显著相关（P＜0.05）。结论:1、BEND4基因在胰腺癌中频繁发生甲基化,且其表达受启动子区甲基化调控。在胰腺癌中,BEND4是一个新的抑癌基因,它可通过激活NHEJ通路而影响DNA的损伤修复。BEND4甲基化是胰腺癌变潜在的标志物,以及ATM抑制剂AZD0156的“协同致死”治疗标志物。2、JAM3在胰腺癌中频繁发生甲基化,其表达受启动子区甲基化调控。JAM3甲基化可能成为胰腺癌潜在的标志物。