凝血因子Ⅷ是目前一种重要的临床用药，广泛应用于甲型血友病、血管性血友病、纤维蛋白原缺乏症、获得性凝血因子Ⅷ缺乏症、弥漫性血管内凝血、获得性凝血因子Ⅷ抑制物所致疾病等疾病，受到医药工业的高度重视。用于临床的凝血因子Ⅷ主要是从血液中分离出来的。过去几十年间，治疗血友病甲的凝血因子Ⅷ浓缩物不断取得进展。凝血因子Ⅷ分离制备方法主要有甘氨酸沉淀法、PEG分段沉淀法、PEG-甘氨酸沉淀法、肝素-酸性沉淀法等。90年代，随着凝胶层析技术的生产应用日益成熟，层析介质的开发，越来越多的凝胶过滤提纯法、离子交换层析法、疏水层析法、单抗亲和层析等方法应用于凝血因子Ⅷ的产业化制备。我国现在用于治疗的凝血因子Ⅷ都是血液来源的，国外的重组凝血因子Ⅷ在中国的注册还没有获批。目前由于原料血浆供应不足，凝血因子Ⅷ产量的骤减导致了临床供应的紧张。华兰生物股份有限公司是我国能生产凝血因子Ⅷ的四家生物公司之一。目前采用PEG沉淀法制备的血源凝血因子Ⅷ，虽然工艺成熟可靠，但凝血因子Ⅷ比活(3-5IU/mg)和回收率较低。离子交换层析法有利于微量血浆蛋白的工业化分离，且能通过层析容易地去除病毒灭活S/D试剂而无需其它额外的去除方法，整个过程简单易行；故计划引入离子交换层析法来提高凝血因子Ⅷ的比活和回收率。 凝血因子Ⅷ原料为血浆，纯化工艺为新鲜冰冻血浆-PEG沉淀-S/D处理-离子交换层析。实验中采用DEAE-650M阴离子胶作为层析介质来纯化凝血因子Ⅷ。影响离子交换层析的因素有离子强度、pH、温度和流速，本文主要探讨离子强度和pH对离子交换制备FⅧ的影响。先采用线性梯度洗脱法，初步筛选制备凝血因子Ⅷ平衡缓冲液含氯化钠的浓度范围和洗脱缓冲液中氯化钠的浓度；然后在同一pH条件下，改变平衡缓冲液中氯化钠的含量，计算在每种平衡缓冲液下凝血因子Ⅷ的回收率和比活，选择最佳的平衡缓冲液的氯化钠的含量；再在同一离子强度条件下，改变pH值，通过计算凝血因子Ⅷ回收率和比活，选择最佳pH值。最后通过正交法去验证不同离子强度和pH值组合，从而筛选出最佳组合。本实验可以看出离子强度和pH值均能不同程度地影响凝血因子Ⅷ的制备。在实验范围内，平衡缓冲液中含135mmol/L氯化钠和pH为6.8为最佳组合。不论小试还是中试放大效果都很好。本工艺通过对离子强度和pH的筛选，制备人高纯凝血因子Ⅷ的可行性，获得了满意的结果，凝血因子Ⅷ比活在120IU/mg以上，总纯化倍数达1500倍(经PEG沉淀S/D灭活后样品的比活为0.08IU/mg)以上，收率为90％。该工艺简单、成本低、回收率和比活高。