论文部分内容阅读
目的： 宫颈癌的发生发展与HPV感染、孕产次、性行为等因素相关，但仅有一小部分人发展为宫颈癌，因此我们认为宫颈癌的发生是由环境因素和遗传易感因素共同作用的结果。但目前尚缺乏能有效反应肿瘤发病风险及预后的标志物，本实验通过生物信息学方法对宫颈癌457个相关基因进行miR-SNP的筛查，最终发现90个miR-SNP位点。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测到miR-181a在宫颈癌组织与癌旁组织中存在差异性表达，选取 miR-181a两个靶基因 SNP位点：miR-181a靶基因KRAS结合位点rs9266，miR-181a靶基因CD4结合位点rs16932921进行病例对照研究，探讨其与宫颈癌发病风险的相关性，寻找反应宫颈癌遗传易感性的标志物，为宫颈癌的预防及治疗提供一个新的方向。 材料与方法： 1.通过 PUBMED文献检索查找宫颈癌相关基因；利用miRanda，Target ScanS，PicTar软件预测可能存在的miRNA结合位点；选择至少两个软件共同预测存在的miRNA结合位点，利用dbSNP数据库分析这些miRNA结合位点上是否存在SNPs。 2.通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-181a在宫颈癌组织与癌旁组织中的表达。 3.选择miR-181a靶基因KRAS结合位点rs9266，miR-181a靶基因CD4结合位点rs16932921进行研究。收集了100例宫颈癌患者及140例健康对照者的血液样本，并提取基因组DNA，采用聚合酶链式反应对特定基因片段进行扩增，之后测序进行基因分型。 结果： 1.软件初步筛选预测宫颈癌457个相关基因上可能有61个基因上存在90个miR-SNP位点。 2. miR-181a存在3个宫颈癌相关靶基因：KRAS、CD4、STC1；共5个miR-SNP位点 3.相对于宫颈癌旁组织，miR-181a在宫颈癌组织中表达下降，差异具有统计学意义（P<0.05）。 4.KRAS rs9266多态的CC、TC、TT基因型在健康对照组的频率分别为65％、31.4%、3.6%，在宫颈癌组的频率分别为49%、45%、6%。对照组的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=0.01，P=0.91)，说明了此对照组是具有群体代表性的。通过 Pearson’sχ2检验，得到宫颈癌患者与健康对照组的基因型分布是存在明显的统计学差异的（χ2=3.98，P=0.046）。通过非条件逻辑回归统计发现，以CC基因型作为参照，TC和TT基因型均与其进行比较，可发现每增加一个等位基因T，患宫颈癌的风险就会增加（TC的OR=1.90，95%CI=1.11-3.26；TT的OR=2.23，95%CI=0.65-7.68）。 5. CD4 rs16932921多态的TT、TA、AA基因型在健康对照组的频率分别为73.6%、25.7%、0.7%，在宫颈癌组的频率分别为74%、21%、5%。对照组的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡的（χ2=1.25，P=0.25），说明了此对照组是具有群体代表性的。通过Pearson’sχ2检验，得到宫颈癌患者与健康对照组的基因型分布差异无统计学意义（χ2=0.35，P=0.55）。 结论： 1.宫颈癌457个相关基因上存在90个miR-SNP位点。 2. miR-181a在宫颈癌组织中呈低表达。 3.本研究发现miR-181a靶基因KRAS rs9266多态性与宫颈癌的发生相关，与CC基因型相比，TC及TT基因型增加患宫颈癌的风险。T等位基因是与宫颈癌易感性相关的风险因素。 4.本研究未发现miR-181a靶基因CD4结合位点rs16932921与宫颈癌的发生风险相关。