【摘 要】
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目的:验证Ubc9/P53/DR5/Caspase-8/Caspase-3参与调控伴放线聚集杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans,A.actinomycetemcomitans)细胞致死性扩张毒素(Cytolethal dist
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目的:验证Ubc9/P53/DR5/Caspase-8/Caspase-3参与调控伴放线聚集杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans,A.actinomycetemcomitans)细胞致死性扩张毒素(Cytolethal distending toxin,CDT)诱导Jurkat细胞凋亡的机制。方法:提取 A.actinomycetemcomitans CDT 全毒素,并用 A.actinomycetemcomi-tans CDT全毒素刺激Jurkat细胞24h,结合前期iTRAQ蛋白芯片的筛查结果,通过Real-time PCR及免疫荧光检测筛选出的关键信号分子表达情况;同时运用过表达和RNA干扰技术,分别获得ubc9、p53、dr5、caspase-8基因过表达及RNA干扰的Jurkat细胞,使用Western blot及Real-time PCR技术对相关下游信号分子进行检测,并通过流式细胞仪检测过表达和RNA干扰处理后Jurkat细胞凋亡情况。结果:RT-PCR及免疫荧光结果表明,A.actinomycetemcomitans CDT刺激细胞24h 后,Ubc9、P53、DR5、Caspase-8 及 Caspase-3 的表达均上调;ubc9、p53、dr5、caspase-8基因过表达和RNA干扰的Jurkat细胞经流式细胞仪检测后,其凋亡率均相应的增高和降低;同时,Western blot及实时荧光定量逆转录PCR结果显示,该通路上相应过表达和RNA干扰的信号分子,其下游信号转导分子的表达量也相应的上调和下调。结论:本研究确认 Ubc9/P53/DR5/Caspase-8/Caspase-3 参与调控 A.actinomy-cetemcomitans CDT诱导Jurkat细胞凋亡的过程,为进一步研究A.actinomy-cetemcomitans CDT介导的局限型侵袭性牙周炎的致病机理提供理论依据,并为临床诊断和治疗局限型侵袭性牙周炎提供新靶标。
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