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既往研究认为,人胎盘间充质干细胞对治疗急性肝衰竭是有益的。在急性肝衰竭中,巨噬细胞和其分泌的肿瘤坏死因子-α (TNF-α)是参与肝细胞凋亡和急性肝衰竭发展的主要因素之一。CD200阳性人胎盘间充质干细胞(CD200positive human placenta mesenchymal stem cells, CD200+hPMSCs)通过与表达在NK细胞、巨噬细胞和DC细胞等上的CD200受体结合,可抑制这些细胞活性、转变免疫反应的类型和抑制巨噬细胞释放TNF-α。目前,间充质干细胞对肝脏再生方面的研究较多,如改善肝脏代谢,抑制肝脏纤维化以及抑制肝细胞凋亡等,部分并已应用临床疾病的治疗。然而,CD200’hPMSCs对人肝脏再生的影响仍然研究较少。目的：探讨在共培养系统中,CD200阳性的人胎盘绒毛膜间充质干细胞(CD200positive human placenta chorionic mesenchymal stem cells, CD200+hPCMSCs)对人正常肝细胞代谢、增殖和凋亡的影响。方法：利用Ⅱ型胶原酶和胰酶消化法从胎盘绒毛膜中分离胎盘绒毛膜间充质干细胞(hPCMSCs),免疫磁珠分选法从hPCMSCs中富集CD200+hPCMSCs。采用生理盐水和Ⅱ型胶原酶两步灌流法分离人原代肝细胞。在合成代谢与增殖实验中,实验分为阴性对照组(0.5%FBS培养基对照,单独培养干细胞上清液对照),对照组(单独培养肝细胞对照)和共培养组(CD200+hPCMSCs:人肝细胞=1：3、1：1和3：1,分别三组)。测定不同组中人原代肝细胞分泌白蛋白和尿素的量,分析不同数量CD200+hPCMSCs对人肝细胞合成代谢的影响；MTT比色法测定不同组中人HL7702肝细胞的增殖水平,评估不同数量CD200+hPCMSCs对人肝细胞增殖的影响。在凋亡实验中,设阴性对照组,凋亡组和抗凋亡组。采用显微镜观察凋亡形态、Annexin-V/PI标记不同组中凋亡的HL7702肝细胞和流式细胞仪检测HL7702肝细胞的凋亡比率,以评估相同数量CD200+hPCMSCs对人肝细胞凋亡的影响。Western blot检测人HL7702肝细胞凋亡相关蛋白Bcl-xL、Bax和Caspase-3在不同组中的表达水平,进一步评估相同数量的CD200+hPCMSCs对人肝细胞凋亡影响的干预机理。结果：在合成代谢实验中,各共培养组与对照组中尿索分泌量(1.93±0.42mg/dl)和蛋白分泌量(85.63±4.02ng/ml)相比,共培养细胞比例为1：3组,尿素和白蛋白分泌量变化均无统计学意义(尿素量为2.53±0.26mg/dl,P=0.418:自蛋白量为69.15±2.38ng/ml,P=0.926);比例为1：1组,尿索和白蛋白分泌量均高于对照组(尿素量2.99±0.74mg/dl,P=0.063;白蛋白量172.52±45.19ng/ml,P <0.05):比例为3：1组,尿素和白蛋白分泌量也均高于对照组(尿素量3.35±0.24mg/dl,P<0.05；白蛋白量249.25±49.83ng/ml,P<0.01)。在增殖试验中，共培养24小时后，1：1组中HL7702肝细胞增殖水平(114.10±2.75%,P<0.01)和3：1组HL7702肝细胞增殖水平(127.16±5.15%,P<0.01)均高于对照组(100%±0.00%)；而与对照组相比,在1：3组中HL7702肝细胞增殖没有统计学差异(97.20±1.85%,P=0.391)。在培养48小时,1：3组(133.36±0.70%,P<0.05),1：1组(133.86±3.30%,P<0.05)和3：1组(142.50±12.30%,,P<0.05)HL7702肝细胞的增殖水平均较对照组(130.03±0.55%)高。同时,在培养72小时,1：3组(161.73±1.96%,P<0.01),1：1组(164.90±0.75%,P<0.01)和3：1组(171.30±5.40%,P<0.01)肝细胞的增殖水平也均高于对照组(139.40±1.85%)。此外,在凋亡实验中,诱导HL7702肝细胞凋亡24h,显微镜观察发现：抗凋亡组HL7702肝细胞凋亡数少于凋亡组,且抗凋亡组中肝细胞膜皱缩,细胞核碎裂程度明显少于凋亡组。在诱导凋亡12h时,流式细胞仪分析提示：抗凋亡组HL7702肝细胞凋亡阳性率(14.30±0.1414%)低于凋亡组HL7702肝细胞凋亡阳性率(20.40±1.4142%),P<0.01.Western blot结果表明：在培养12h和24h,抗凋亡组抗凋亡Bcl-xL蛋白1相对表达量(Bcl-xL/β-actin)均高于凋亡组；在培养12h和24h时,抗凋亡组促凋亡Caspase-3蛋白相对表达最(Caspase-3/β-actin)均低于凋亡组。结论：CD200+hPCMSCs增强人正常肝细胞的合成代谢、促进肝细胞的增殖以。通过增强抗凋亡Bcl-xL蛋白和降低促凋亡Caspase-3蛋白的表达来抑制肝细胞凋