近年来发展起来的免疫层析试纸条检测技术具有检测方便、成本低廉、操作简单等优点,其中作为代表的胶体金免疫层析检测技术虽然可以快速定性判断,但不可定量检测;而荧光免疫层析检测技术虽然可以定量检测,但其检测灵敏度还需进一步提高。面对着日趋提高的临床检测需求,本文将胶体金免疫层析试纸条与荧光免疫层析试纸条相结合,利用胶体金免疫层析检测技术的聚集显色快速定性特点,以及荧光免疫层析检测技术的灵敏可定量优势,通过纳米材料表面能量转移技术,设计出一个反向荧光增强的免疫层析检测技术,其具有荧光信号、颜色信号的双信号读出机制,弥补现有免疫层析检测技术的缺陷,可对肿瘤标志物实现一种超灵敏、定性定量的快速检测。首先,氯金酸在还原作用下聚合为金纳米颗粒,并与标记抗体通过静电吸附作用形成胶体金探针。然后,将其作为信号标记物,制备了胶体金免疫层析试纸条,并优化了试纸条的性能。随后,将荧光素Cy5通过酰胺反应修饰到包被抗体上形成荧光探针,制备了反向荧光增强免疫层析试纸条,并全面评价了试纸条的质量与性能。最终,在待测物选为癌胚抗原后,通过双模态的检测方式,初步筛查了120例临床病人血清。实验结果表明:将以上两种探针作为信号标记物引入到免疫层析检测中,制备的反向荧光增强免疫层析试纸条,反应时间短(仅需10分钟)、特异性好、灵敏度高(相比常规免疫层析试纸条,灵敏度提高了两个数量级)。其用于肿瘤标志物CEA的120例临床检测准确率达97.5%,结果准确可靠,双模态检测的测试效果良好。以上研究成果为肿瘤标志物的家庭、社区式快速筛查提供了科学依据,同时为构建新型体外快速检测方法提供了新思路。