论文部分内容阅读
我国劳动人民几千年来在与疾病作斗争的过程中,通过实践,不断认识,逐渐积累了丰富的中草药知识。中药有疗效持久和副作用少等相比于西药特有的优点。很多中药的疗效不但经受住了长期医疗实践的检验,而且也已被科学研究所证实。但由于中药有效成分的复杂性,人们对中草药药效的怀疑性,及很多中药的药用机理至今仍未被我们所完全认知,阻碍了中药的广泛推广和应用。因此,深入研究中药的有效成分及探讨其药用机理显得十分迫切。本文通过细胞水平从九种活血化瘀植物药中筛选有效药物,进而观察植物药介导ERK、TGF-β下,大鼠糖尿病肾病改善情况。一)通过煎煮、浓缩和冻干,最终获得九种植物药的冻干粉;二)体外实验1)MTT实验:发现了活血化瘀植物水提取物(除虎杖)在1mg/ml下对细胞增值没有影响,从而确定了药物用药范围;2)通过加入rhTGF-βl建立细胞过表达细胞外基质的模型;3)利用2)建立的模型,加入各种活血化瘀植物药水提取物(终浓度200μg/ml),观察对p-Smad2的影响,发现泽兰水提取物能够显著逆转rhTGF-βl刺激增加的p-Smad2蛋白,而对Smad2蛋白没影响;4)具体的研究了泽兰水提取物对TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、p-Smad2、Smad2、Smad4、Smad7、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白表达的影响,首先发现rhTGF-β能显著的提高TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱp-Smad2、Smad2、Smad4和p-ERK1/2蛋白表达,随后研究发现泽兰能够显著减少TβR-Ⅱ、p-Smad2、Smad4、Smad7、p-ERK1/2蛋白表达(与rhTGF-β1刺激组相比),对Smad2、ERK1/2和TβR-Ⅰ蛋白表达没有影响,减少Smad7的表达。三)体外实验1)成功建立了大鼠糖尿病肾病模型,为后续的药物实验研究提供了保证;2研究发现泽兰水提取物用药组虽不能降低血糖,增加体重和减少尿量,但与模型组相比能显著降低SCr, BUN、尿蛋白(P<0.05),提高SOD活性(P<0.05);3) RT-PCR的结果显示泽兰中剂量组(6g/kg/day)的大鼠TGF-β1的mRNA显著性显著下降(与模型组相比);Western blot(WB)实验结果发现泽兰用药组能够显著性见降低p-Smad2的蛋白表达(P<0.01),但对Smad2的蛋白表达没有影响。